Biossíntese e caracterização de inibidores de fotossíntese produzidos pela cianobactéria Fischerella (2003)
- Authors:
- Autor USP: RABELLO, EDENILSON - CENA
- Unidade: CENA
- Assunto: BACTÉRIAS FIXADORAS DE NITROGÊNIO
- Language: Português
- Abstract: Propôs-se neste trabalho identificar genes que codificam sintetases de peptídeos não ribossômicos (NRPSs) e sintases de compostos policetônicos (PKSs), potencialmente envolvidos na biossíntese de aminoacilpolicetônicos como as fischerelinas, inibidores de fotossíntese produzidos pela cianobactéria Fischerella sp. CENA 19. Estudos preliminares empregando "Western blot" com anticorpos específicos para NRPSs e PKSs, revelaram a existência de três NRPSs e de uma PKS na cepa CENA 19. Posteriormente, a análise e purificação de metabólitos hidrofóbicos produzidos por Fischerella sp. CENA 19, confirmou a presença de inibidores de fotossíntese. Metabólitos foram extraídos com metanol (60%) e purificados por extração com éter terc-butil-metílico, cromatografia líquida em resina C-18 e cromatografia líquida de alta resolução (HPLC). Após HPLC obtiveram-se metabólitos com pureza superior a 60% (m/z 409, MH+) e 90% (m/z 370, MH+), os quais foram caracterizados por espectrometria de massas. Ambos os metabólitos foram analisados quanto a capacidade de inibir fotossíntese em plantas de tabaco (Nicoatiana tabacum). Os ensaios demonstraram que os dois compostos proporcionam um bloqueio da transferência de elétrons de Q-A para QB. Análise por fragmentação do espectro de massas indicou que o composto m/z 409 é provavelmente FsA e pela análise de RMN concluiu-se que o composto (m/z 370) corresponde a 12-epi hapalindol F, outro alcalóide com atividade algicidaproduzido por Fischerella sp. Iniciadores de reação (primers) degenerados para NRPS e PKS foram utilizados para a amplificação de DNA genômico a fim de se identificar genes potencialmente associados às sintetases/sintases identificadas por Western blot e extrapolar sua possível relação com a biossíntese de fischerelinas. Fragmentos de DNA foram amplificados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) com iniciadores direto e reverso para um mesmo gene, e reação de extensão a ) 72 °C (1 min), e através de um método alternativo, empregando-se um iniciador direto para genes de PKSS. No método alternativo empregou-se uma mistura de DNA polimerases e reação de extensão a 68 °C (30 min). Produtos de PCR foram clonados e seqüenciados e a função dos genes a eles relacionados foi determinada utilizando-se BLAST. Pelo método alternativo, obtivemos um fragmento 2.700 pares de base. Este produto contém dois genes contíguos (NRPS e PKS) que estão codificados por quadros abertos de leitura distintos. Os genes identificados classificados como candidatos à biossíntese de fischerelinas, haja vista a estrutura híbrida destes compostos
- Imprenta:
- Publisher place: Piracicaba
- Date published: 2003
- Data da defesa: 28.03.2003
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ABNT
RABELLO, Edenilson. Biossíntese e caracterização de inibidores de fotossíntese produzidos pela cianobactéria Fischerella. 2003. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2003. . Acesso em: 11 abr. 2026. -
APA
Rabello, E. (2003). Biossíntese e caracterização de inibidores de fotossíntese produzidos pela cianobactéria Fischerella (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. -
NLM
Rabello E. Biossíntese e caracterização de inibidores de fotossíntese produzidos pela cianobactéria Fischerella. 2003 ;[citado 2026 abr. 11 ] -
Vancouver
Rabello E. Biossíntese e caracterização de inibidores de fotossíntese produzidos pela cianobactéria Fischerella. 2003 ;[citado 2026 abr. 11 ]
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