Análise da diversidade do transcriptoma da glândula de veneo da sepente Bothrops insularis: identificação e caracterização de novas proteínas através da geração de Expressed Sequence Tags (ESTs) (2003)
- Authors:
- Autor USP: AZEVEDO, INÁCIO DE LOIOLA MEIRELLES JUNQUEIRA - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIO
- Subjects: SERPENTES; TOXINAS
- Language: Português
- Abstract: Neste trabalho foi gerado um banco de Expressed Seuence Tags (ESTs) objetivando inicialmente a caracterização parcial do transcriptoma das glândulas de veneno da serpente Bothrops insularis - Viperidae. Num momento seguinte, alguns dos cDNAs identificados e de maior relevância foram totalmente sequenciados e expressos em E. coli para uma caracterização bioquímica e biológica das proteínas recombinantes. As ESTs de 610 clones indenpendentes de uma biblioteca primária de cDNA foram montadas em 297 clusers por similaridade contra o GenBank, revelando a identificação provável de 210 diferentes produtos gênicos e a existência de outros 87 transcritos desconhecidos. As seqüências de toxinas correspondem a 56% de todos os transcritos (85 clusters), sendo as metaloproteases (23%) e o precursor dos peptídeos potenciadores de bradicinina (BPPs) (11%) os componentes mais freqüentes. Outras toxinas importantes foram identificadas, como serino proteases, L-amino ácido oxidases e um novo transcrito abundante, similar ao Vascular Endothelial Growth Factor humano (svVEGF). Esse fator foi expresso em E. coli e caracterizado, mostrando ser capaz de aumentar a permeabilidade vascular em camundongos. Além disso, uma antisoro contra o svVEGF foi produzido e mostrou a distribuição ubíqua dessa nova toxina nos venenos de várias serpentes, inclusive em Elapidae. Entre os 125 clusters correspondentes a proteínas celulares, a maioria representa moléculas envolvidas naexpressão de enes e proteínas, notoriamente na montagem de pontes dissulfeto. A incomum alta representação da proteína dissulfeto isomerase (PDI) reflete a especialização deste tecido na síntese de toxinas. Um cDNA codificando uma proteóna EF-hand similar à calmodulina foi também expresso em E. coli e sua estrutura secundária, bem como sua capacidade de ligar-se ao 'CA IND. 2+' foram demonstradas por dicroísmo circular (CD). Essa proteína é especificamente expressa ) nas glândulas de veneno de viperídeos mas não expressa em outros tecidos de serpentes nem em glândula salivar de rato, constituindo um novo componente celular, provavelmente envolvido em processos de produção e/ou secreção. A presença de seqüências prováveis de retrotransposons também foi observada e pode estar relacionada à geração da diversidade de formas parálogas de toxinas. Concluindo, nosso banco de ESTs permitiu a identificação das classes mais importantes de toxinas presentes em venenos viperídicos, que devem estar relacionados com os complexos processos hemorrágicos desencadeados pelo veneno. Além disso, ele permitiu a composição do primeiro conjunto abrangente de seqüências de genes reptilianos
- Imprenta:
- Data da defesa: 26.02.2003
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ABNT
JUNQUEIRA-DE-AZEVEDO, Inácio de Loiola Meirelles. Análise da diversidade do transcriptoma da glândula de veneo da sepente Bothrops insularis: identificação e caracterização de novas proteínas através da geração de Expressed Sequence Tags (ESTs). 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003. . Acesso em: 13 nov. 2024. -
APA
Junqueira-de-Azevedo, I. de L. M. (2003). Análise da diversidade do transcriptoma da glândula de veneo da sepente Bothrops insularis: identificação e caracterização de novas proteínas através da geração de Expressed Sequence Tags (ESTs) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Junqueira-de-Azevedo I de LM. Análise da diversidade do transcriptoma da glândula de veneo da sepente Bothrops insularis: identificação e caracterização de novas proteínas através da geração de Expressed Sequence Tags (ESTs). 2003 ;[citado 2024 nov. 13 ] -
Vancouver
Junqueira-de-Azevedo I de LM. Análise da diversidade do transcriptoma da glândula de veneo da sepente Bothrops insularis: identificação e caracterização de novas proteínas através da geração de Expressed Sequence Tags (ESTs). 2003 ;[citado 2024 nov. 13 ]
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