Estabelecimento de um sistema de mutagênese por transposon em Streptomyces avermitilis para identificação de sítios neutros de clonagem (2002)
- Autor:
- Autor USP: MALDONADO, GABRIEL PADILLA - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Aikawa, M1; Horvat, L.I 2; Cullum, J2.; Padilla, G1.1Lab. Genética ICB/USP-SP. 2Univ. Kaiserslautern (Alemanha). Streptomyces avermitilis é uma bactéria filamentosa, produtora de um importante agente antiparasitário, a avermectina. A pouco mais de 5 anos, os primeiros relatos de parasitas resistentes a esse antibiótico impulsionaram a busca de novas drogas. E com o desenvolvimento das técnicas de biologia molecular, ferramentas genéticas que outrora eram difíceis de serem manipuladas, hoje, são acessíveis. Um exemplo, refere-se ao uso de transposons, elementos genéticos móveis capazes de inativar genes alvos, carregar genes marcadores ou mesmo de localizar regiões neutras de clonagem, sem, no entanto, afetar genes que possam ser essenciais a bactéria em estudo. Neste trabalho, o transposon Tn 5424 albergado em um plasmídeo temperatura sensível e de baixo número de cópias foi utilizado para mutagenizar cepas de S. avermitilis (selvagem e melhor produtora)Os resultados utilizando duas técnicas de transformação distintas (eletroporação e a transformação de protoplastos mediados por polietilenoglicol) mostraram freqüências na ordem de 1.0 a 4.6 x 10E1 transf./microgr DNA. Para que a transposição ocorresse, os transformantes foram crescidos a uma temperatura de 40 C e selecionados em meio contendo tioestrepton como antibiótico de seleção. As freqüências de transposição obtidas foram da ordem de 0.05 a 2.0% na população transformada. A confirmação depotenciais transposantes foram evidenciados pela técnica de PCR. Experimentos de Southern do DNA de 5 transposantes digeridos com a enzima de restrição PstI mostraram indícios de transposição aleatória sem rearranjos genéticos aparentes. O sequênciamento dos genes transposados em S. avermitilis, permitirá a localização física e genética da transposição, podendo correlacioná-los com características fenotípicas da bactéria em questão. O resultado desta análise permitirá identificar regiões neutras no cromossomo de S. avermitilis para inserção de genes homólogos de outros Streptomyces, e obtenção de antibióticos híbridos
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2002
- Source:
- Título: Resumos
- Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV
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ABNT
PADILLA, Gabriel. Estabelecimento de um sistema de mutagênese por transposon em Streptomyces avermitilis para identificação de sítios neutros de clonagem. 2002, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002. . Acesso em: 19 out. 2024. -
APA
Padilla, G. (2002). Estabelecimento de um sistema de mutagênese por transposon em Streptomyces avermitilis para identificação de sítios neutros de clonagem. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Padilla G. Estabelecimento de um sistema de mutagênese por transposon em Streptomyces avermitilis para identificação de sítios neutros de clonagem. Resumos. 2002 ;[citado 2024 out. 19 ] -
Vancouver
Padilla G. Estabelecimento de um sistema de mutagênese por transposon em Streptomyces avermitilis para identificação de sítios neutros de clonagem. Resumos. 2002 ;[citado 2024 out. 19 ] - Estudos fisiologicos da producao de metabolitos secundarios de streptomyces olindensis
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