Proteína desacopladora mitocondrial de plantas. PUMP: estudos calorimétricos e funcionalidade da atPUMP de Arabidopsis thaliana expressa em R. coli (2002)
- Authors:
- Autor USP: ANDRADE, PAULA BRESCIANI MARTINS DE - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: ÁCIDOS GRAXOS; FISIOLOGIA VEGETAL; PROTEÍNAS DE PLANTAS
- Language: Português
- Abstract: A existência de uma proteína mitocondrial desacopladora em plantas, PUMP, foi demonstrada em 1995. A PUMP, como a proteína desacopladora de mitocôndrias de tecido adiposo marrom, UCP1, e outras proteínas homólogas descobertas posteriormente, aumenta a condutividade de membrana a H Nucleotídeos de purina, PN, inibem a atividade das proteínas desacopladoras e o rner-anismo de condução de ´H POT.+´ depende da presença de ácidos graxos livres, FFA. A atividade e a expressão da PUMP são estimuladas pela exposição ao frio e mudam durante o amadurecimento de frutos. A expressão do gene da PUMP de Arabidopsis thaliana em E. coli permite a obtenção de ATPUMP. Neste trabalho, analisando a funcionalidade da ATPUMP incorporada em proteotipossomos, demonstramos que esta proteína é funcional. A incorporação de proteínas desacopladoras em proteolipossomos fornece um sistema modelo que permite analisar as suas propriedades funcionais e mecanísticas. A condutância a ´H POT.+´ em proteolipossomos contendo PUMP isolada de batata foi claramente ativada por FFA. Contudo, a inibição por PN não se mostrou reprodutível. A ATPUMP, reconstituída em proteolipossomos, foi ativada por FFA com ´K IND.m´S aparentes de: 42 ´MU´M (ácido linoleico, LA), 55 ´MU´M (ácido laurico) e 70 ´MU´M (ácido paimitico), é inibida por PN com ´K IND.i´S aparentes de: 0.8 mM (GDP), 0.85 mM (ATP), 0.98 mM (GTP) e 1.4 mM (ADP). O efluxo de H+ ativado por LA mediado por ATPUMP aumentou exponencialmenteem função do potencial transmembrânico (´DELTA´´PSI´). O coeficiente de partição (Kp) entre a fase aquosa e proteolipossomos contendo ATPUMP para o LA de 64170, foi 1,6 vezes superior que ao Kp obtido para o LA em lipossomos. Em ensaios de ligação obtidos usando microcalorimetria de titulação isotérmica (ITC), determinou-se que a ATPUMP tem, provavelmente, dois sítios de ligação para o LA e que essa interação e exotérmica. Em ensaios de microcalorimetria ) com suspensão de mitocôndrias de batatas, determinou-se que há uma correlação linear entre o calor produzido e o oxigênio consumido (65,6 kcal/mol ´O IND.2´) quando a PUMP foi ativada por LA. Através dos resultados obtidos até então, concluo que a PUMP (ATPUMP) é um desacoplador mitocondrial presente em plantas. Os estudos apresentados aqui, de reconstituição em lipossomos, foram essenciais para a compreensão da regulação da atividade dessa proteína. Além disso, foram obtidas as primeiras medidas diretas de liberação de calor pela PUMP por microcalorimetria
- Imprenta:
- Data da defesa: 04.09.2002
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ABNT
ANDRADE, Paula Bresciani Martins de. Proteína desacopladora mitocondrial de plantas. PUMP: estudos calorimétricos e funcionalidade da atPUMP de Arabidopsis thaliana expressa em R. coli. 2002. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2002. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072018-111203/. Acesso em: 01 out. 2024. -
APA
Andrade, P. B. M. de. (2002). Proteína desacopladora mitocondrial de plantas. PUMP: estudos calorimétricos e funcionalidade da atPUMP de Arabidopsis thaliana expressa em R. coli (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072018-111203/ -
NLM
Andrade PBM de. Proteína desacopladora mitocondrial de plantas. PUMP: estudos calorimétricos e funcionalidade da atPUMP de Arabidopsis thaliana expressa em R. coli [Internet]. 2002 ;[citado 2024 out. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072018-111203/ -
Vancouver
Andrade PBM de. Proteína desacopladora mitocondrial de plantas. PUMP: estudos calorimétricos e funcionalidade da atPUMP de Arabidopsis thaliana expressa em R. coli [Internet]. 2002 ;[citado 2024 out. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072018-111203/
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