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Clonagem e expressão do PIF humano: uma nova citocina envolvida na caquexia (2002)

  • Authors:
  • Autor USP: BELIZARIO, JOSE ERNESTO - ICB
  • Unidade: ICB
  • Assunto: FARMACOLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: Objetivo: O PIF (proteolyis-inducing factor) é uma glicoproteína de 24 kDa, com uma porção central protéica de 4 kDa e duas cadeias de oligossacarídeos de 14 e 6 KDa, que foi identificada no plasma de pacientes com câncer e caquexia e isolado bioquimicamente do adenocarcinoma de camundongo MAC-16 pela capacidade de induzir degradação intracelular de proteínas. O objetivo desse estudo é o mapeamento, clonagem e expressão do PIF humano e roedor. Métodos e Resultados: A análise em in silico no banco de dados do genoma humano mostrou que o PIF está localizado no cromossoma 12 e possui 9 exons. O mRNA do PIF contendo 497 bp foi identificado em uma biblioteca de cDNA de mRNA extraído da pele, medula óssea e tecido adiposo de feto humano e clonado no plasmídeo pTripIEX2 (DKFZ). Em seguida realizamos sub-clonagens nos vetores de expressão em procariotos: pAE (6xHis tag) e pGEX-4T (GST), e eucariotos: pcDNA 3.1. Os vetores estão sendo usados para imunização e produção de anticorpos em coelhos e purificação da proteína recombinante em E.coli BL21 e células HeLaAlém disso, estudos de RT-PCR mostraram a expressão de PIF em monócitos do sangue periférico e nas linhagens de melanoma SK-28 e B-16. Conclusões: A proteína PIF codificada pelos exons 3, 4, 5 e 7 corresponde a uma proteína de 14 Kda. Outras formas do PIF, denominadas peptídeo de evasão e sobrevivência (3 kDa), peptídeo antibiótico (4,5 kDa) e glicoproteína (24, 30, 66 kDa) parece ser expressasdiferencialmente dependendo do tipo celular e condições fisiológicas. Os estudos visando entender a expressão e produção do PIF recombinante é um passo importante para entendermos suas diversas funções biológicas
  • Imprenta:
  • Source:
  • Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV

  • How to cite
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    • ABNT

      GARAY, H M; ROMERO, C; ALVES, J; et al. Clonagem e expressão do PIF humano: uma nova citocina envolvida na caquexia. Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002.
    • APA

      Garay, H. M., Romero, C., Alves, J., Vannier, E., Tisdale, M., & Belizário, J. E. (2002). Clonagem e expressão do PIF humano: uma nova citocina envolvida na caquexia. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP.
    • NLM

      Garay HM, Romero C, Alves J, Vannier E, Tisdale M, Belizário JE. Clonagem e expressão do PIF humano: uma nova citocina envolvida na caquexia. Resumos. 2002 ;
    • Vancouver

      Garay HM, Romero C, Alves J, Vannier E, Tisdale M, Belizário JE. Clonagem e expressão do PIF humano: uma nova citocina envolvida na caquexia. Resumos. 2002 ;

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