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Efeito da liofilizaçao sobre a estrutura e a atividade enzimatica da L-asparaginase de Escherichia coli (2002)

  • Authors:
  • Autor USP: SILVA, REGIANE DA - FCF
  • Unidade: FCF
  • Sigla do Departamento: FBT
  • Subjects: ESCHERICHIA COLI (APLICAÇÕES TERAPÊUTICAS); ENZIMAS (ESTUDO;APLICAÇÕES TERAPÊUTICAS); ENZIMOLOGIA; LIOFILIZAÇÃO (EFEITOS;ENZIMOLOGIA)
  • Language: Português
  • Abstract: As L-asparaginases bacterianas (L-asparaginase amidohidrolase, E.C.3.5.1.1) sao enzimas de alto valor terapeutica devido ao seu uso no tratamento de leucemia linfocitica aguda. A L-asparaginase da Escherichia coli por ser uma enzima periplasmica com alta afinidade, e particularmente efetiva em certas terapias de cancer infantil. Muitos agentes terapeuticas recentes sao proteinas e peptideos que surgiram do design molecular de drogas e tecnologia de DNA recombinante. Numerosos estudos tem demonstrado que aditivos preservam a estrutura e a atividade biologica de cada molecula destas proteinas. Entretanto, o mecanismo de proteçao, pelo qual estes aditivos funcionam, nao tem sido totalmente elucidado. O objetivo do presente trabalho e investigar detalhadamente o efeito da liofilizaçao sobre a estrutura e a atividade enzimatica da L- asparaginase, tanto em celulas integras de Escherichia coli, como na enzima purificada. Ate recentemente a maneira para se avaliar o comportamento de um aditivo e o comportamento da agua na estabilizaçao de uma proteina durante a liofilizaçao consistia na medida dos parametros de atividade apos a reidrataçao, porem atualmente modernas tecnicas de Ressonancia Magnetica Nuclear (RMN) de baixa resoluçao sao utilizadas para se entender o comportamento da agua nas interaçoes com proteinas. E a Espectroscopia de lnfravermelho por Transformada de Fourier apresenta grande potencial no estudo de estabilizaçao de proteinas durante a liofilizaçao.Utilizou-se o calculo de porcentagem de retençao de atividade para expressar os valores de atividade enzimatica estudados. Estes calculos foram realizados para os sistemas congelados e para os sistemas congelados e liofilizados. Os sistemas foram tratados em velocidades de congelamento diferentes (´20 GRAUS CENTIGRADOS´/min, ´5 GRAUS CENTIGRADOS´/min e ´2 GRAUS CENTIGRADOS´/min), sendo em seguida liofilizados por 24 horas. Sao apresentados ) resultados sobre o efeito das diferentes velocidades de congelamento e o efeito da liofilizaçao nos diferentes sistemas aditivo-enzima e aditivo-celula. Utilizaram-se os aditivos-. sacarose, maltose, lactose, inositol, manitol e trealose testados em diferentes concentraçoes (30, 90 e 150mM). Para identificar quais as condiçoes e os aditivos que apresentaram uma crioproteçao satisfatoria. Nos sistemas maltose-enzima e trealose-enzima observou-se um aumento da crioproteçao com o aumento da concentraçao de aditivo. Para os sistemas maltose-enzima, congelados lentamente, os resultados de retençao de atividade foram: ´8,67 POR CENTO´, ´14,02 POR CENTO´ e ´30,80 POR CENTO´ respectivamente para 30, 90 e l5OmM. O sistema enzima-maltose (150mM) congelado rapidamente e liofilizado apresentou a maior retençao de atividade (´111,11 POR CENTO´) e tambem o maior valor de ´TIND.2´ (81 ´MU´s) nos resultados referentes a RMN. Nos sistemas trealose-enzima nas concentraçoes de 90 e l5OmM apresentaram retençao de atividade ´89,93 PORCENTO´ e ´79,74 POR CENTO´, respectivamente
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 06.02.2002
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      SILVA, Regiane da; PITOMBO, Ronaldo Nogueira de Moraes. Efeito da liofilizaçao sobre a estrutura e a atividade enzimatica da L-asparaginase de Escherichia coli. 2002.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2002. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-13092006-115358/pt-br.php >.
    • APA

      Silva, R. da, & Pitombo, R. N. de M. (2002). Efeito da liofilizaçao sobre a estrutura e a atividade enzimatica da L-asparaginase de Escherichia coli. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-13092006-115358/pt-br.php
    • NLM

      Silva R da, Pitombo RN de M. Efeito da liofilizaçao sobre a estrutura e a atividade enzimatica da L-asparaginase de Escherichia coli [Internet]. 2002 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-13092006-115358/pt-br.php
    • Vancouver

      Silva R da, Pitombo RN de M. Efeito da liofilizaçao sobre a estrutura e a atividade enzimatica da L-asparaginase de Escherichia coli [Internet]. 2002 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-13092006-115358/pt-br.php

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