Clonagem expressão, cristalização e estudos preliminares de difração de raio-X de metaloendoproteases (2002)
- Authors:
- USP affiliated authors: KIMURA, EDNA TERUKO - ICB ; FERRO, EMER SUAVINHO - ICB
- School: ICB
- Subject: HISTOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Uma das abordagens subseqüentes ao sequenciamento genômico completo de organismos é a análise estrutural de proteínas, através de cristalografia de Raios-X ou por ressonância magnética nuclear. O entendimento da conformação das proteínas é essencial para o reconhecimento de suas funções e interações, assim como para a busca de novos fármacos. O objetivo deste projeto é determinar a estrutura cristalográfica de metaloproteases conhecidas, como as endopeptidases thimet-endopeptidase (EP24.15), neurolisina (EP24.16) e a enzima conversora de endotelina (ECE). As metaloendopeptidases EP24.15 e EP 24.16 foram subclonadas no plasmídeo pGex-4T2 e expressas em E.coli. A homogeinidade das proteínas recombinantes foi maior de 95%, como analizado por SDS-PAGE. Cristais de EP24.16 complexada com Dinorfina A1-13, difratando a 3,0 Å, foram obtidos pelo método de difusão de vapor por gota pendente, misturando-se 2µ de uma solução de proteína a 5mg/mL com 2µ de uma solução contendo 0,65% (w/v) polyethylene glycol 400, 2.1M (NH4)2SO4, 0-100µ M ZnCl2, 0.1M HEPES pH 7.5. Um "screening" de condições de cristalização da EP24.15 complexada com Dinorfina A1-13 ou proteína 14.3.3 está em andamento. A clonagem da enzima conversora de endotelina foi realizada por RT-PCR e sua expressão em células Sf9 de inseto está em andamento. A conclusão destes estudos será importante para elucidar o mecanismo exato de interação entre essas enzimas e seus substratos, um passo fundamental para odesenvolvimento de novos inibidores de potencial uso clínico
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Place of publication: São Paulo
- Date published: 2002
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference title: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV
-
ABNT
BAÍA, Gilson S; GOBERSZTEJN, Fernanda; GOÑI, Camila N; et al. Clonagem expressão, cristalização e estudos preliminares de difração de raio-X de metaloendoproteases. Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002. -
APA
Baía, G. S., Gobersztejn, F., Goñi, C. N., Mantovani, L., Shida, C. S., Martín, F. J. M., et al. (2002). Clonagem expressão, cristalização e estudos preliminares de difração de raio-X de metaloendoproteases. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Baía GS, Gobersztejn F, Goñi CN, Mantovani L, Shida CS, Martín FJM, Kimura E, Ferro ES. Clonagem expressão, cristalização e estudos preliminares de difração de raio-X de metaloendoproteases. Resumos. 2002 ; -
Vancouver
Baía GS, Gobersztejn F, Goñi CN, Mantovani L, Shida CS, Martín FJM, Kimura E, Ferro ES. Clonagem expressão, cristalização e estudos preliminares de difração de raio-X de metaloendoproteases. Resumos. 2002 ; - Enzima conversora de endotelina: clonagem, expressão e purificação
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