Expressão, purificação e caracterização das enzimas GumD e GumC envolvidas na biossíntese do exopolissacarídeo produzido pela bactéria Xylella fastidiosa (2002)
- Authors:
- Autor USP: PIERI, CELINA DE - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: PROTEÍNAS; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: A Clorose Variegada de Citrus (CVC) é uma doença que vem atingindo grandes plantações de laranja no Brasil e outros países como Estados Unidos, França e Espanha. O princiapl efeito da doença é o surgimento da manchas amarelas nas folhas que progridem para toda a extensão levando-a à necrose. Os frutos são pequenos, apresentam casca dura, sendo impróprios para o consumo. O agente causador da CVC é a bactéria Xylella fastidiosa que é limitada ao xilema. a bactéria é tranmitida por insetos conhecidos como "cigarrinhas" que se alimentam na seiva do xilema. Esta bactéria apresenta em seu genoma um Operon contendo 9 genes (B,C,D,E,F,H,J,K,M) responsáveis pela biossíntese do exopolissacarídeo denominado goma fastidiana, que pode estar envolvido na sua patogenicidade. No presente trabalho, realizou-se estudos com as enzimas GumD (uma enzima glicosiltransferase I que faz a primeira adição de glicose-1-fosfato ao lipídeo prenol) e GumC (que provavelmente está envolvida na estapa de polimerização e/ou secreção do polissacarídeo formado através da membrana da bactéria), com o objetivo de contribuir para melhor entendimento da via biossintética. O gene gumD, que codifica a enzima Gumd, foi clonado nos vetores de expressão pMAL-c2x e pKK223-3. A proteína GumD foi purificada através das cromatografias de troca aniônica e filtração a gel. O peso molecular e o pI da enzima foram determinados usando respectivamente a técnica de filtração a gel e sistema Fast de eletroforese. Aenzima foi caracterizada quanto ao seu enovelamento através da técnica de Dicroísmo Circular, apresentanso um espectro característico de estrutura secundária enovelada, composta predominantemente por 'alfa'-hélices. O gene gumC, que codifica para a proteína GumC, foi clonado nos vetores de expanssão pMAL-c2x (no qual a enzima é expressa em fusão com a proteína MBP - Maltose Binding Protein) e pET29a ( a proteína é expressa sem fusão). ) A proteína em fusão GumC-MBP foi parcialmente pura através da coluna de amilose e foi caracterizada através da técnica de Imunoblotting. A enzima GumC expressa no vetor pET29a está em fase de purificação. Anticorpos anti-GumC-MBP foram produzidos em camundongos e serão utilizados como uma forma de caracterizar a proteína GumC expressa sem fusão. Estudos estruturais destas enzimas poderão trazer informações fundamentais para o conhecimento da via biossintética, assim como para o deenvolvimento de inibidores específicos
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2002
- Data da defesa: 24.06.2002
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ABNT
PIERI, Celina de. Expressão, purificação e caracterização das enzimas GumD e GumC envolvidas na biossíntese do exopolissacarídeo produzido pela bactéria Xylella fastidiosa. 2002. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2002. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18112013-115231/. Acesso em: 06 out. 2024. -
APA
Pieri, C. de. (2002). Expressão, purificação e caracterização das enzimas GumD e GumC envolvidas na biossíntese do exopolissacarídeo produzido pela bactéria Xylella fastidiosa (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18112013-115231/ -
NLM
Pieri C de. Expressão, purificação e caracterização das enzimas GumD e GumC envolvidas na biossíntese do exopolissacarídeo produzido pela bactéria Xylella fastidiosa [Internet]. 2002 ;[citado 2024 out. 06 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18112013-115231/ -
Vancouver
Pieri C de. Expressão, purificação e caracterização das enzimas GumD e GumC envolvidas na biossíntese do exopolissacarídeo produzido pela bactéria Xylella fastidiosa [Internet]. 2002 ;[citado 2024 out. 06 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18112013-115231/
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