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Purificação, caracterização, clonagem e sequenciamento de 'beta'-glicosidades de Tenebrio molitor (coleoptera) (2001)

  • Authors:
  • Autor USP: FERREIRA, ALEXANDRE HAMILTON PEREIRA - IQ
  • Unidade: IQ
  • Sigla do Departamento: QBQ
  • Subjects: INSETOS; BIOQUÍMICA ANIMAL; DIGESTÃO ANIMAL (COMPOSIÇÃO); BIOLOGIA MOLECULAR; ENZIMAS
  • Language: Português
  • Abstract: No lúmen do intestino médio da larva de Tenebrio molitor existem 4 'beta'-glicosidases (denominadas 1, 2, 3a e 3b), que não estão presentes na comida do animal. Elas foram purificadas usando-se técnicas de eletroforese e cromatografias de troca iônica e interação hidrofóbica. A 'beta'-Glicosidase 1 (Mr 59.000) é instável a '30 GRAUS'C mas é estabilizada na presença do substrato. Ela praticamente não tem atividade sobre galactosideos e cliva di- e oligossacarídeos. A enzima possui apenas um sítio ativo que apresenta quatro subsítios para ligação de glicose. Seu papel fisiológico deve ser o da clivagem de oligo - e principalmente dissacarídeos. A 'beta'-Glicosidase 2 (Mr 67.000) é muito instável a '30 GRAUS'C e hidrolisar com maior eficiência galactosídeos sintéticos, cliva muito mal lactose e é incapaz de clivar glucosídeos. Ela apresenta dois sítios ativos sendo que um deles cliva 1'beta'Dgal e lactose, que é ativado por Triton X-100, enquanto o outro não é ativado pelo detergente e hidrolisa NP'beta'Dgal e NP'beta'Dfuc. O papel fisiológico para esta enzima não está claro, mas imagina-se que ela esteja envolvida na digestão de galcatolipídeos. As 'beta'-Glicosidases 3a e 3b (Mr 59.000) parecem ser isoformas, uma vez que elas têm parâmetros cinéticos semelhantes, perfis de eluição, de peptídeos gerados por clivagem proteolítica, em UPLC idênticos e a mesma seqüência de anunoácidos para um peptídeo interno comum. Um anticorpo específico produzido contra a'beta'-Glicosidase 3a reconhece a 'beta'-Glicosidase 3b, mas não reconhece as 'beta'-Glicosidases 1 e 2. Dois clones foram obtidos usando esse anticorpo para selecionar uma biblioteca de cDNA obtida dos mRNAs do intestino médio de Tenebrio molitor. O resultado final mostrou um cDNA de 1.570 pb codificando para uma proteína madura de 485 aminoácidos. ) As proteínas codificadas pelos dois cDNAs têm somente quatro aminoácidos diferentes e podem corresponder às 'beta'- Glicosidades 3a e 3b. As seqüências mostraram uma alta similaridade com proteínas da família 1 de glicosídeo hidrolases e codificam todos os peptídeos seqüenciados a partir da clivagem das 'beta'-Glicosidases 3a e 3b, foi mostrado que essas são secretadas na parte posterior do intestino médio por uma via ecocítica. Essas enzimas têm quatro subsítios para a ligação da glicose e podem hidrolisar di- e oligossacarídeos, alquil glicosídeos e glicosídeos tóxicos de plantas. Experimentos de competição entre substratos, mostraram que elas têm só um sítio ativo responsável para a hidrólise de todos os substratos. Seu papel deve ser principalmente a digestão intermediária de hemiceluloses
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 14.03.2001
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      FERREIRA, Alexandre Hamilton Pereira; FERREIRA, Clélia. Purificação, caracterização, clonagem e sequenciamento de 'beta'-glicosidades de Tenebrio molitor (coleoptera). 2001.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2001. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13082008-081701/ >.
    • APA

      Ferreira, A. H. P., & Ferreira, C. (2001). Purificação, caracterização, clonagem e sequenciamento de 'beta'-glicosidades de Tenebrio molitor (coleoptera). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13082008-081701/
    • NLM

      Ferreira AHP, Ferreira C. Purificação, caracterização, clonagem e sequenciamento de 'beta'-glicosidades de Tenebrio molitor (coleoptera) [Internet]. 2001 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13082008-081701/
    • Vancouver

      Ferreira AHP, Ferreira C. Purificação, caracterização, clonagem e sequenciamento de 'beta'-glicosidades de Tenebrio molitor (coleoptera) [Internet]. 2001 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-13082008-081701/

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