Micrométodo para extração de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia familial (2001)
- Authors:
- USP affiliated authors: HIRATA, MARIO HIROYUKI - FCF ; HIRATA, ROSARIO DOMINGUEZ CRESPO - FCF
- Unidade: FCF
- Subjects: HIPERCOLESTEROLEMIA (DIAGNÓSTICO); DNA (EXTRAÇÃO;MÉTODOS); GENÉTICA
- Language: Português
- Abstract: Os métodos para extração de DNA empregados hoje em dia na rotina laboratorial, utilizam grandes volumes de sangue, o que constitui um problema quando se usam amostras pediátricas. Outros métodos envolvem etapas, não sendo adequadas a para rotina laboratorial. no presente trabalho, foi desenvolvido um método rápido de extração de DNA de sangue total para pequenos volumes de amostra. Brevemente, volumes iguais de sangue total e NaI a 6M foram misturados. A seguir, as proteínas e debris celulares foram removidas por adição de uma mistura de clorofórmio/álcool (24:1). O DNA foi isolado da fase aquosa e purificado com isopropanol. Amostras de DNA forma também pelo método de precipitação salina, previamente desenvolvido em nosso laboratório. A quantificação e a pureza do DNA foram realizadas por espectrofotometria em 260 e 280 nm, sendo a sua integridade verificada por eletroforese em gel de agarose a 1%. A quantidade de DNA de sangue total obtida pelo método proposto foi 1,5 vezes superior à obtida pela técnica de precipitação salina (28,6 mais ou menos 7,8 vs. 19,1 mais ou menos 3,5 'mü'g/ml de sangue, respectivamente; p=0,0003). A pureza do DNA foi também superior ('A IND. 260/280'= 1,73 mais ou menos 0,18 vs. 1,61 mais ou menos 0,06, respectivamente; p=0,0164). utilizando o DNA extraído pelo micrométodo, obtivemos sucesso na triagem de alterações genéticas no receptor da LDL e na apolipoproteína B em pacientes com Hipercolesterolemia Familial (HF). Em resumo,o procedimento de extração de DNA é simples, rápido e aplicável para obtenção de DNA genômico de alta qualidade em 30 minutos, sendo portanto, útil no diagnóstico molecular da HF
- Imprenta:
- Publisher place: Rio de Janeiro
- Date published: 2001
- Source:
- Título: Revista Brasileira de Análises Clínicas
- ISSN: 0370-369X
- Volume/Número/Paginação/Ano: v. 33, n. 3, p. 111-116, 2001
-
ABNT
SALAZAR, Luís Antônio et al. Micrométodo para extração de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia familial. Revista Brasileira de Análises Clínicas, v. 33, n. 3, p. 111-116, 2001Tradução . . Acesso em: 28 out. 2025. -
APA
Salazar, L. A., Melo, C. E. de, Cavalli, S. A., Hinuy, H. M., Hirata, M. H., & Hirata, R. D. C. (2001). Micrométodo para extração de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia familial. Revista Brasileira de Análises Clínicas, 33( 3), 111-116. -
NLM
Salazar LA, Melo CE de, Cavalli SA, Hinuy HM, Hirata MH, Hirata RDC. Micrométodo para extração de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia familial. Revista Brasileira de Análises Clínicas. 2001 ; 33( 3): 111-116.[citado 2025 out. 28 ] -
Vancouver
Salazar LA, Melo CE de, Cavalli SA, Hinuy HM, Hirata MH, Hirata RDC. Micrométodo para extração de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia familial. Revista Brasileira de Análises Clínicas. 2001 ; 33( 3): 111-116.[citado 2025 out. 28 ] - Next generation sequencing in the diagnosis of familial hypercholesterolemia
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