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Avaliação de parâmetros que influenciam a transformação genética do Eucalyptus grandis via Agrobacterium (2001)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: ANDRADE, ALEXANDER DE - ESALQ
  • Unidades: ESALQ
  • Sigla do Departamento: LGN
  • Subjects: BACTÉRIAS FITOPATOGÊNICAS; EUCALIPTO; MELHORAMENTO GENÉTICO VEGETAL; TRANSFERÊNCIA DE GENES; VETORES
  • Language: Português
  • Abstract: O trabalho teve como objetivo otimizar a metodologia de transformação de plantas de Eucalyptus grandis; uma importante espécie florestal amplamente cultivada no Brasil. Foram estudadas a transformação por agrobiobalistica de explantes com acumulo de gemas axilares e do SAAT ("sonication-assisted Agrobacterium mediated transformation"). Ambas as técnicas causam microferimentos nos explantes aumentando a penetração da Agrobacterium nos tecidos vegetais. Na agrobiobalistica o explante é submetido ao bombardeamento com microparticulas seguida por inoculação com a bactéria; enquanto que no SAAT o explante é submetido à sonicação por breves periodos de tempo na presença da bacteria. Os experimentos de transformação foram avaliados pela analise da expressão transitoria do gene reporter uidA. Os parâmetros estudados na transformação por agrobiobalistica foram: pressão de disparo (pressão do gás hélio), distância de vôo das microparticulas, estabilidade da expressão do gene uidA e temperatura de co-cultivo. As frequências masia elevadas da expressão da 'beta'-glucuronidase foram observadas utilizando 1350 PSI de gás hélio, 9,5cm de distância de vôo dos microprojeteis e temperatura de 26 'graus'C durante o co-cultivo. Para otimizar a transformação de explantes com acumulo de gemas axilares for realizado um estudo histologico, o qual permitiu constatar que as áreas meristematicas estão localizadas na superficie do explante. O meristema é formado pela rediferenciação decelulas da epiderme e das primeiras camadas do parenquina cortical caracterizando sua origem exogena. A localizxação histologica do produto da expressão do gene reporter uidA mostrou que esta expressão ocorre apenas em celulas já diferenciadas, não sendo encontrada durante os tratamentos com celulas meristematicas. Para realizar os ensaios com SAAT foi selecionado previamente um clone com caracteristicas favoraveis à transformação por Agrobacterium. ) A maior taxa de plantas que apresentaram atividade da 'beta'-glucuronidase foram observadas utilizando-se 60 segundos de sonicação; tempos superiores a este causaram um comprometimento da regeneração do explante. A sonicação adicional, após a sonicação preliminar do explante, juntamente com a bactéria, melhora a eficiência do processo de transformação. Os resultados demonstram que o uso de SAAT é viavel na transformação de eucalipto com Agrobacterium
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 22.10.2001
  • Online source access
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    • ABNT

      ANDRADE, Alexander de; LABATE, Carlos Alberto. Avaliação de parâmetros que influenciam a transformação genética do Eucalyptus grandis via Agrobacterium. 2001.Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2001. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-15032002-111342/ >.
    • APA

      Andrade, A. de, & Labate, C. A. (2001). Avaliação de parâmetros que influenciam a transformação genética do Eucalyptus grandis via Agrobacterium. Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-15032002-111342/
    • NLM

      Andrade A de, Labate CA. Avaliação de parâmetros que influenciam a transformação genética do Eucalyptus grandis via Agrobacterium [Internet]. 2001 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-15032002-111342/
    • Vancouver

      Andrade A de, Labate CA. Avaliação de parâmetros que influenciam a transformação genética do Eucalyptus grandis via Agrobacterium [Internet]. 2001 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-15032002-111342/

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