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Tese

Clonagem e caracterização de genes que codificam proteínas envolvidas no efluxo de drogas em Aspergillus nidulans e Aspergillus fumigatus (2001)

  • Authors:
  • Autor USP: NASCIMENTO, ADRIANA MENDES DO - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RGE
  • Assunto: ASPERGILLUS (ANÁLISE GENÉTICA)
  • Language: Português
  • Abstract: Desde a década passada, a incidência das infecções invasivas causadas por patógenos oportunistas vem aumentando dramaticamente, devido à alterações no estado imunológico dos pacientes. Infelizmente, com o amplo uso dos agentes antifúngicos, os elatos acerca de resistência também têm aumentado, ressaltando a necessidade de um melhor entendimento dos mecanismos moleculares que conferem resistência à drogas. Aspergillus fumigatus é a espécie de Aspergillus causadora da maioria das doenças pulmonares fatais em pacientes gravemente imunocomprometidos. Para estes pacientes, as opções de tratamento são limitadas à terapia com anfotericina B e/ou itraconazole. Como etapa preliminar na investigação da resistência à drogas em A. fumigatus, mutantes resistantes à itraconazole (RIT) foram selecionados in vitro após a irradiação de uma linhagem susceptível com luz ultravioleta. Um total de cinqüenta e cinco mutantes foram isoladas em presença de 50'mü'g 'ml POT.-1' de itraconazole. A amplificação por PCR utilizando primers degenerados, baseados em regiões conservadas de genes da superfamília ABC (ATP-Binding Cassette), cujos produtos estão relacionados à resistência múltipla à drogas, foi usada como estratégia para identificar potenciais genes codificadores de bombas de efluxo na espécie de importância clínica A. fumigatus e na espécie não patogência proximamente relacionada, A. nidulans. Seis clones correspondentes a potenciais genes codificadores de transportadores demembrana foram identificados em A. fumigatus, enquanto quatro genes foram identificados em A. nidulans. Experimentos de "real-time PCR"com "molecular beacons"foram usados para quantitativamente medir os níveis de expressão de dois genes de efluxo putativos de A. fumigatus, denominados afuMDR3 e afuMDR4, em 23 linhagens mutantes resistentes crescidas em presença ou ausência de itraconazole (10 ou 100 'mü'g 'ml POT.-1'). Os níveis de mRNA do gene afuMDR3 ) foram aumentados 61-, 12- e 4- vezes nas linhagens mutantes RIT13, RIT24 e RIT11, respectivamente, quando crescidas em presença de itraconazole. Os maiores níveis de transcritos do gene afuMDR4, em resposta à presença de itraconazole, foram produzidos pelas linhagens mutantes RIT11 e RIT13 (24- e 42- vezes, respectivamente). Os níveis de mRNA de um gene de efluxo de droga de A. nidulans, denominado abcD, foi avaliada através da análise por Northern blotting utilizando-se RNA total extraído de uma linhagem selvagem, cultivada em presença e ausência de compostos diferentes. Os resultados mostraram um aumento no níveis dos transcritos de abcD referentes a micélios tratados com miconazole, camptotecina, metotrexato, kanamicina, adriblastina e mitomicina. A análise da seqüência de aminoácidos deduzida codificada pelo gene afuMDR3 de A. fumigatus revelou alto grau de similaridade com transportadores do tipo MSF (Major Superfamily Facilitor) envolvidos em resistência à drogas em Saccharomyces cerevisiae. Com basena presença de domínios conservados, os produtos odificados pelos genes afuMDR4 e abcD de A. fumigatus e A. nidulans, respectivamente, foram apontados como proteínas membros da família dos transportadores ABC do "cluster"das P-glicoproteínas, as quais são conhecidas por participar no fenômeno de resistência múltipla à drogas em diversos organismos. Nossos resultados sugerem que estes novos genes de efluxo de drogas identificados em A. fumigatus podem contribuir mecanisticamente para os fenótipos de resistência exibidos pelos mutantes RIT, podendo ser impostantes do ponto de vista clínico. O elevado grau de similaridade (77%) entre os produtos putativos dos genes afuMDR4 e abcD sugere que A. nidulans pode representar um sistema modelo convniente para o estudo da resistência à drogas em fungos filamentosos
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 31.10.2001
    • How to cite
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    • ABNT

      NASCIMENTO, Adriana Mendes do. Clonagem e caracterização de genes que codificam proteínas envolvidas no efluxo de drogas em Aspergillus nidulans e Aspergillus fumigatus. 2001. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2001. . Acesso em: 31 dez. 2025.

    • APA

      Nascimento, A. M. do. (2001). Clonagem e caracterização de genes que codificam proteínas envolvidas no efluxo de drogas em Aspergillus nidulans e Aspergillus fumigatus (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Nascimento AM do. Clonagem e caracterização de genes que codificam proteínas envolvidas no efluxo de drogas em Aspergillus nidulans e Aspergillus fumigatus. 2001 ;[citado 2025 dez. 31 ]

    • Vancouver

      Nascimento AM do. Clonagem e caracterização de genes que codificam proteínas envolvidas no efluxo de drogas em Aspergillus nidulans e Aspergillus fumigatus. 2001 ;[citado 2025 dez. 31 ]

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