Clonagem e caracterização do gene atrD, que codifica um transportador do tipo ABC (ATP-Binding Cassette) envolvido na resistência à múltiplas drogas no dermatófito Trichophyton rubrum (2001)
- Authors:
- Autor USP: FACHIN, ANA LÚCIA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: FUNGOS (ANÁLISE GENÉTICA;RESISTÊNCIA;EFEITOS DE DROGAS); DERMATOPATIAS
- Language: Português
- Abstract: Os transportadores ABC (ATP-Binding Cassette) são ATPases tráficas altamente conservadas desde as bactérias até o homem. Membros desta grande família de proteínas tem função tanto na captação de nutrientes quanto no transporte de agentes citotóxicos através da membrana celular, resultando na redução do acúmulo intracelular de toxinas. Os transportadores ABC são bem conhecidos especialmente no fenômeno de resistência à múltiplas drogas (MDR) em células tumurais humanas. Trichophyton rubrum é um fungo patogênico que causa micose superficial em humanos, mas que pode setornar invasivo em pacientes imunodeprimidos. Estas infecções são geralmente tratadas com drogas antifúngicas, incluindo griseofulvina e derivados azólicos. A resistência a estes derivados azólicos tem sido relacionada com o transporte de drogas pela célula, geralmente associado com o aumento da expressão de bombas de efluxo. Através da confecção de primers degenerados, baseados na similaridade de seqüência, nós identificamos em T. rubrum uma seqüência de DNA que codifica uma seqüência de aminoácidos característica de transportador ABC. Este fragmento foi usado como sonda para rastrear uma biblioteca genômica de T. rubrum que foi construída em nosso laboratório. Clones positivos foram isolados, subclonados e seqüenciados. Um gene, o atrD, de 4048 nucleotídeos, aparentemente interompido por um intron de 52 pb foi identificado e sua seqüência foi depositada no Gene Bank sob o número deacesso AF291822. A análise no programa BLAST da seqüência deduzida de 1331 aminoácidos da proteína AtrDp revelou alta identidade com os transportadores AtrD de A. nidulans, AfuMDR1 de A. fumigatus, AflMDR1 de A.flavus e com a glicoproteína-P humana, enquanto os domínios de ligação ao nucleotídeo (NBDs) foram praticamente idênticos. Experimentos de Northern blot, revelaram um aumento no nível de transcrição do gene atrD quando o micélio foi exposto a agentes ) inibidores quimicamente não relacionados como griseofulvina, cloranfenicol, acriflavina e derivados azólicos. Um sistema de transformação foi padronizado em t. rubrum, utilizando-se um cassette de disrupção contendo o gene de resistência a higromicina, como um marcador de seleção. Através deste sistema a função e a não essencialidade do gene atrD foi comprovada. Ensaios in vitro revelaram que o mutante DD2 ('delta'atrD) tem atividade proteásica normal e é mais sensível à griseofulvina, acriflavina, tioconazol e 4NQO que a linhagem H6. O aumento da transcrição do gene atrD na presença de diversos compostos quimicamente não relacionados e a sensibilidade a várias destas substâncias apresentada pelo mutante DD2 ('delta'atrD) são evidências que este transportador deve participar de um mecanismo de resistência à múltiplas drogas. Como os transportadores ABC além de desempenharem função no efluxo de drogas, podem também secretar proteínas envolvidas na patogenecidade, eles são potenciais alvos para odesenvolvimento de novos antifúngicos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2001
- Data da defesa: 01.11.2001
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ABNT
FACHIN, Ana Lúcia. Clonagem e caracterização do gene atrD, que codifica um transportador do tipo ABC (ATP-Binding Cassette) envolvido na resistência à múltiplas drogas no dermatófito Trichophyton rubrum. 2001. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2001. . Acesso em: 11 out. 2024. -
APA
Fachin, A. L. (2001). Clonagem e caracterização do gene atrD, que codifica um transportador do tipo ABC (ATP-Binding Cassette) envolvido na resistência à múltiplas drogas no dermatófito Trichophyton rubrum (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Fachin AL. Clonagem e caracterização do gene atrD, que codifica um transportador do tipo ABC (ATP-Binding Cassette) envolvido na resistência à múltiplas drogas no dermatófito Trichophyton rubrum. 2001 ;[citado 2024 out. 11 ] -
Vancouver
Fachin AL. Clonagem e caracterização do gene atrD, que codifica um transportador do tipo ABC (ATP-Binding Cassette) envolvido na resistência à múltiplas drogas no dermatófito Trichophyton rubrum. 2001 ;[citado 2024 out. 11 ]
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