Seqüenciamento de um segmento de 9 kb à montante do gene C3-22 de Rhynchosciara americana e análise de sua expressão em linhagens transgênicas de Drosophila melanogaster (2001)
- Authors:
- Autor USP: SOARES, MARIA ALBERTINA DE MIRANDA - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIO
- Assunto: DNA (SEQÜÊNCIA)
- Language: Português
- Abstract: Nós seqüenciamos e analisamos uma região de 9.200 pb situada a 5 minutos do gene C3-22, com a finalidade de identificar seqüências envolvidas na regulação dos processos de transcrição e replicação/amplificação desse gene. A análise da estrutura primária dessa região nos permitiu identificar algumas seqüências apresentando estrutura palindrômica, repetições e homologia com sítios consensos para a ligação de fatores envolvidos no controle da expressão gênica. Esses fatores são as proteínas codificadas pelo "Broas complex" e o receptor de ecdisona. Com o intuito de iniciar estudos visando definir seqüências controladoras da transcrição e amplificação do gene C3-22, nós transformamos Drosophila com um elemento P contendo aproximadamente 17 kb do amplicom do pufe de DNA C3, incluindo a unidade de transcrição e seqüências à montante do gene, onde foi identificada a zona de iniciação da replicação usada no processo de amplificação. O segmento usado para transformar Drosophila inclui toda região seqüenciada. Seis linhagens transgênicas foram obtidas, das quais cinco eram provenientes de um único evento indenpendente de integração do transgene, verificado através da hibridação in situ e análises por "Southem blotting". "Southem blots" de diferentes tecidos e estágios do desenvolvimento dessas cinco linhagens foram hibridados com sondas específicas representando essa região do amplicom do pufe C3, com a finalidade de analisar o nível de amplificação do segmento transformado.As medidas da quantidade relativa do DNA do segmento transformado nas linhagens transgênicas indicam que esta região do amplicom do pufe C3 não é amplificada em Drosophila. A expressão do gene C3-22 foi analisada nas linhagens transgênicas em diferentes estágios do desenvolvimento de Drosophila através de Ensaios de Proteção à RNase. Os resultados demonstraram que tanto a regulação temporal como a especificidade tecidual da expressão desse ) gene não são mantidas em Drosophila, sendo esse constitutivamente transcrito em todas as linhagens transgênicas. Nós também analisamos a transcrição do gene C3-22 em outros tecidos larvais de R. americana, na época de sua máxima amplificação e expressão na glândula salivar. O RNAm específico foi detectado a níveis bastante baixos em gânglio nervoso, corpo gorduroso e intestino/ceco. Medidas dos títulos de ecdisona realizadas na hemolinfa de larvas de R. americana ao longo do último estádio do desenvolvimento e análises cromossômicas demonstraram que a época de máxima expansão do pufe C3 correlaciona-se com um aumento no nível desse hormônio e a regressão do pufe com um pico de ecdisona
- Imprenta:
- Data da defesa: 05.11.2001
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ABNT
SOARES, Maria Albertina de Miranda. Seqüenciamento de um segmento de 9 kb à montante do gene C3-22 de Rhynchosciara americana e análise de sua expressão em linhagens transgênicas de Drosophila melanogaster. 2001. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2001. . Acesso em: 12 set. 2024. -
APA
Soares, M. A. de M. (2001). Seqüenciamento de um segmento de 9 kb à montante do gene C3-22 de Rhynchosciara americana e análise de sua expressão em linhagens transgênicas de Drosophila melanogaster (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Soares MA de M. Seqüenciamento de um segmento de 9 kb à montante do gene C3-22 de Rhynchosciara americana e análise de sua expressão em linhagens transgênicas de Drosophila melanogaster. 2001 ;[citado 2024 set. 12 ] -
Vancouver
Soares MA de M. Seqüenciamento de um segmento de 9 kb à montante do gene C3-22 de Rhynchosciara americana e análise de sua expressão em linhagens transgênicas de Drosophila melanogaster. 2001 ;[citado 2024 set. 12 ]
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