Extração e caracterização da enzima hexoquinase em sistemas de duas fases aquosas (2001)
- Authors:
- Autor USP: SOUZA, MARIA APARECIDA DE - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBT
- Subjects: ENZIMAS GLICOLÍTICAS (EXTRAÇÃO;CARACTERÍSTICAS); ENZIMOLOGIA; BIOTECNOLOGIA; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: A hexoquinase (HK) e uma enzima chave da via glicolitica, que catalisa a reaçao de fosforilaçao da glicose, por isso muito utilizada em estudos bioquimicase em metodos analiticos, para medida dos teores de glicose, frutose, manose, ATP e da atividade enzimatica da creatina-quinase. Neste trabalho extraiu-se essa enzima atraves do Sistema de Duas Fases Aquosas (SDFA) por ser uma tecnica de baixo custo e de facil ampliaçao de escala. Foram utilizadas celulas de S.cerevisiae obtidas de fermento comercial. Estas foram rompidas e a suspensao obtida foi utilizada para extraçao em SDFA. O sistema foi formado por PEG (fase superior) e fosfato (fase inferior). Diversos sistemas foram preparados para se estudar as variaveis que poderiam influenciar a separaçao dessa enzima para cada uma das fases, tais como: pH, temperatura, agitaçao, tempo de repouso do sistema, presença de NACI, massa molar e concentraçao do PEG e concentraçao de fosfato. Os sistemas foram analisados atraves da atividade enzimatica e teor de proteinas totais. Ao, final desses estudos foi possivel determinar um sistema formado por ´22,5 POR CENTO´ de PEG 4009/mol e ´17,9 POR CENTO´ de fosfato, pH 7,5, temperatura de ´4O GRAUS CENTIGRADOS´, tempo de repouso apos agitaçao de 1 hora, como aquele que forneceu o melhor resultado de extraçao da hexoquinase, mostrado atraves do coeficiente de partiçao (K) obtido, igual a 396,30. Pode-se entao, estudar as caracteristicas cineticas e termodinamicas da enzima,que apresentaram valores variados,mostrando a influencia dos componentes dos sistemas de duas fases sobre a enzima e permitiram verificar a viabilidade da tecnica de SDFA para obtençao da HK
- Imprenta:
- Data da defesa: 31.08.2001
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ABNT
SOUZA, Maria Aparecida de. Extração e caracterização da enzima hexoquinase em sistemas de duas fases aquosas. 2001. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2001. . Acesso em: 14 maio 2025. -
APA
Souza, M. A. de. (2001). Extração e caracterização da enzima hexoquinase em sistemas de duas fases aquosas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Souza MA de. Extração e caracterização da enzima hexoquinase em sistemas de duas fases aquosas. 2001 ;[citado 2025 maio 14 ] -
Vancouver
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