Modulação da óxido nítrico síntese em plaquetas pelo colágeno (2001)
- Authors:
- Autor USP: SCAVONE, CRISTOFORO - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FARMACOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivos: As plaquetas possuem um sistema de produção de óxido nítrico (NO) a partir de L-arginina. A estimativa da atividade da NOS é um dos métodos mais utilizados para o estudo do NO. Os objetivos deste trabalho são: a padronização deste ensaio, incluindo a modulação da enzima pelo colágeno, já que as condições dos mesmos são bastante variáveis na literatura. Foram testadas concentrações variadas de arginina fria e de proteína além do tempo de incubação. Métodos: foram colhidos 30ml de sangue humano com anticoagulante (citrato); as plaquetas foram obtidas após centrifugações. Em seguida, as plaquetas foram rompidas por ultra-som; determinou-se a concentração de proteínas totais e diluiu-se a amostra na concentração desejada. Foram testadas concentrações de 40, 80 e 160mg de proteína, e tempos de 30 e 60 minutos a 37°C, em um meio reacional contendo 4mM FAD, 4mM FNM, 10mg/ml calmodulina, 1mM NADPH, 25mM BH4 e 3 concentrações de arginina fria, 10mM, 1mM, 120nM, [3H]arginina (0,5mCi). Ao término da reação adicionou-se 1ml de Hepes 20mM. O meio reacional passou por uma coluna de resina, onde a arginina marcada ficou retida e a citrulina marcada eluida. A radioatividade foi quantificada por um contador de radiação b. Para obtenção da curva dose-resposta a modulação da enzima foi feita com colágeno nas seguintes concentrações: 0; 06; 1.0; 2.0; 3.0; 5.0; 6.0; 8.0; 9.0mg/ml; a incubação foi por 8 minutos a 37°C. Resultados: ficou definida que naconcentração de 120nM de arginina fria, 80mg de proteína e 60 minutos de incubação, a enzima trabalha na sua máxima atividade e linearidade. O colágeno estimula a produção de NO segundo uma curva dose-resposta. Conclusão: a modulação da enzima pelo colágeno mostra que o ensaio e a padronização estão otimizados
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2001
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas
-
ABNT
KAWAMOTO, Elisa Mitiko et al. Modulação da óxido nítrico síntese em plaquetas pelo colágeno. 2001, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2001. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Kawamoto, E. M., Glezer, I., Munhoz, C. D., Marcourakis, T., & Scavone, C. (2001). Modulação da óxido nítrico síntese em plaquetas pelo colágeno. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Kawamoto EM, Glezer I, Munhoz CD, Marcourakis T, Scavone C. Modulação da óxido nítrico síntese em plaquetas pelo colágeno. Resumos. 2001 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Kawamoto EM, Glezer I, Munhoz CD, Marcourakis T, Scavone C. Modulação da óxido nítrico síntese em plaquetas pelo colágeno. Resumos. 2001 ;[citado 2024 abr. 24 ] - Cellular 'NA POT.+' Pump as a site of action for carbon monoxide and glutamate: a mechanism for long-term modulation of cellular activity
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