Caracterização molecular do DNA genômico de Rhabditis (Oscheius) pseudodolichura (linhagem CEW1) (2001)
- Authors:
- Autor USP: WINTER, CARLOS EDUARDO - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: PARASITOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivos: A linhagem CEW1 isolada primeiramente por Winter (Comp. Biochem. Physiol. 103B, 189, 1992) foi identificada como Rhabditis (Oscheius) pseudodolichura (Carta, USDA, comunicação pessoal). O principal objetivo deste projeto é obter dados fisico-quimicos sobre o DNA genômico de CEW1. Métodos e Resultados: DNA total foi isolado de vermes crescidos em cultura líquida. O DNA foi obtido pelos métodos usuais, fragmentado por passagem em agulha (21 Gauge) ou nebulizador (Inalar compact, NS Ind.), produzindo fragmentos de 3-5 kb e 2-3 kb respectivamente. Usamos os DNAs de Escherichia coli HB101 (50% GC), Micrococcus luteus (72% GC) and Caenorhabditis elegans (36% GC) como marcadores de densidade. Os DNAs foram centrifugados em solução de CsCl (r=1,7284 g/cm3), acrilamida/bis-acrilamida, TEMED e riboflavina. Os tubos foram montados no escuro e centrifugados a 156.844 g por 40 horas a 20ºC em um rotor TLA 120.2 numa ultracentrífuga modelo OptimaTM, Beckman. Depois da centrifugação os tubos foram expostos à luz fluorescente por 10 minutos para polimerizar os monomeros de acrilamida. O gel de poliacrilamida foi retirado do tubo, corado com Brometo de Etídeo (EtBr) 0,5 mg/ml (m/v) e fotografado. O conteúdo de GC de CEW1 foi calculado como sendo 41,53 %. O Tm foi calculado, desnaturando as mesmas amostras em espectrofotômetro GBC UV-visible (cedido pelo Dr. Arthur Gruber, FMVZ/USP/SP). Hibridação do oligonucleotídeo (TTAGGC)27 em Southern de DNA genômico sugere que ostelômeros de CEW1 são iguais aos de C. elegans e Ascaris. Conclusão: Mostramos assim que o método de CsCl/acrilamida pode ser um instrumento útil para determinar o conteúdo de GC, tendo mostrado que o conteúdo de GC de CEW1 é maior do que o de C. elegans. CEW1 contem as mesmas repetições de telômeros comuns em nematóides
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2001
- Source:
- Título: Resumos
- Conference titles: Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas
-
ABNT
AHN, I Y e WINTER, Carlos Eduardo. Caracterização molecular do DNA genômico de Rhabditis (Oscheius) pseudodolichura (linhagem CEW1). 2001, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2001. . Acesso em: 08 out. 2024. -
APA
Ahn, I. Y., & Winter, C. E. (2001). Caracterização molecular do DNA genômico de Rhabditis (Oscheius) pseudodolichura (linhagem CEW1). In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Ahn IY, Winter CE. Caracterização molecular do DNA genômico de Rhabditis (Oscheius) pseudodolichura (linhagem CEW1). Resumos. 2001 ;[citado 2024 out. 08 ] -
Vancouver
Ahn IY, Winter CE. Caracterização molecular do DNA genômico de Rhabditis (Oscheius) pseudodolichura (linhagem CEW1). Resumos. 2001 ;[citado 2024 out. 08 ] - Further analysis of a proteolytic processed vitellogenin from a free-living rhabditid nematode related to c. Elegans
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