Tese

Análise funcional da alça C-terminal de bothropstoxina-I, uma fosfolipase A2 lys 49 isolada do veneno de bothrops jararacussu (2001)

• Authors:
  • Chioato, Lucimara
  • Ward, Richard John (Orientador)
• Autor USP: CHIOATO, LUCIMARA - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RBQ
• Assunto: BIOQUÍMICA
• Language: Português
• Abstract: Fosfolipases A2 (EC 3.1.1.4; PLA2) são enzimas que catalisam a hidrólise das ligações éster na posição sn-2 de fosfolipídeos sn-3. PLA2s que apresentam ausência de atividade catalítica foram isoladas do veneno de espécies de serpentes dos géneros Agkistrodon, Bothrops a Trimeresurus. As seqúências de aminoácidos destas proteínas revelaram que o ácido aspártico na posição 49 está substituído por lisina. Embora nenhuma atividade catalítica contra substratos sintéticos tenha sido observada nas PLA2s Lys49, a interação com membranas de lipossomos provoca uma rápida liberação do conteúdo aqüoso por um mecanismo 'Ca POT. 2+'-independente. Além disso, as PLA2s-Lys49 apresentam um amplo espectro de propriedades farmacológicas, incluindo miotoxicidade. Baseado em resultados cristalográfïcos e espectroscópicos, um modelo para explicar a atividade 'Ca POT. 2+'-independente das PLA2s Lys49 foi anteriormente proposto, no qual a interface homodimérica atua como uma "dobradiça" resultando nas formas "aberta" a "fechada" do dímero. Na interação com membranas, a transição da estrutura quaternária entre estas duas conformações, resulta na inserção da região C-terminal dentro da bicamada, rompendo a organização lipídica. Utilizando Bothropstoxina-1, uma PLA2 Lys49 isolada do veneno de Bothrops jararacussu como sistema modelo, proteínas recombinantes mutadas na alça C-terminal foram produzidas para avaliar a base estrutural do mecanismo 'Ca POT. 2+'-independente de danificaçãoda membrana. Mutantes sítio-dirigido de BthTX-I foram expressos sob a forma de corpos de inclusão em E. coli BL21, redobrados e purificados por cromatografia de fase reversa. Os resultados dos experimentos de liberação de calceína encapsulada em lipossomos demostraram que mutações das cargas positivas na região C-terminal têm efeitos significativos sobre as propriedades de danificação de membrana. Baseado nestes resultados, sugeriu-se um modelo no qual as ) cargas positivas da região distal do C-terminal interagem eletrostaticamente com as cargas negativas da membrana, a como conseqüência, a região proximal da alça C-terminal torna-se parcialmente introduzida na bicamada lipídica. Este modelo foi testado por comparação da emissão de fluorescência intrínsica do triptofano de três mutantes simples de Trp na região C-terminal, na presença a ausência de membranas de lipossomos. Os resultados demostraram que, embora a alça C-terminal não penetre no interior da bicamada lipídica, ela faz um contato mais superficial. Os resultados de miotoxicidade com os mesmos mutantes C-terminal identificaram resíduos localizados em uma região de 'alfa'-hélice curta, que são importantes na determinação desta atividade farmacológica. Estes resíduos foram claramente distintos daqueles que alteraram a atividade de danificação de membrana 'Ca POT. 2+'-independente, e demonstram que as duas atividades são independentes, apesar da sobreposição dos determinantes estruturais na superficieprotéica
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2001
• Data da defesa: 16.03.2001

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How to cite

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• ABNT

  CHIOATO, Lucimara. Análise funcional da alça C-terminal de bothropstoxina-I, uma fosfolipase A2 lys 49 isolada do veneno de bothrops jararacussu. 2001. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2001. . Acesso em: 18 abr. 2024.

• APA

  Chioato, L. (2001). Análise funcional da alça C-terminal de bothropstoxina-I, uma fosfolipase A2 lys 49 isolada do veneno de bothrops jararacussu (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Chioato L. Análise funcional da alça C-terminal de bothropstoxina-I, uma fosfolipase A2 lys 49 isolada do veneno de bothrops jararacussu. 2001 ;[citado 2024 abr. 18 ]

• Vancouver

  Chioato L. Análise funcional da alça C-terminal de bothropstoxina-I, uma fosfolipase A2 lys 49 isolada do veneno de bothrops jararacussu. 2001 ;[citado 2024 abr. 18 ]

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