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Determinação da estrutura cristalográfica por difração de raios-X da enzima glicose-6-fosfato isomerase humana (2001)

  • Authors:
  • Autor USP: CORDEIRO, ARTUR TORRES - IFSC
  • Unidade: IFSC
  • Sigla do Departamento: FFI
  • Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; BIOQUÍMICA; CRISTALOGRAFIA
  • Language: Português
  • Abstract: O trabalho realizado como parte do programa de mestrado em física aplicada sub-área biomolecular, teve como objeto de estudo a enzima glicose-6-fosfato isomerase de humanos (PGI-hum). Este trabalho envolveu principalmente três áreas de estudos: biologia molecular, bioquímica e cristalografia. A parte de biologia molecular refere-se a sub-clonagem do gene da PGI-hum a partir de uma biblioteca de cDNA de cérebro de feto humano - capítulo 2 - e a expressão deste gene em bactérias Escherichia coli - capítulo 3. A parte de bioquímica envolve a purificação e caracterização de parâmetros cinéticos da enzima PGI-hum recombinante. Além dos parâmetro cinéticos, foram realizados ensaios de eficiência inibitória para quatro compostos similares ao substrato, cedidos em colaboração com o pesquisador Dr. Laurent Salmon (Lab. de Química Biorgânica e Bioinorgânica de Universidade de Paris-XI). Esta etapa encontra-se descrita nos capítulos 3 e 4. Uma vez definido o protocolo de purificação e confirmada a atividade enzimática para a PGI-hum recombinante, iniciou-se a terceira etapa do projeto: cristalização e determinação da estrutura por difração de raios-X. O primeiro passo, nesta última fase do trabalho, foi determinar as condições de cristalização da PGI-hum - capítulo 5. Depois de obtidos os cristais, foram coletados dois conjuntos de dados de difração de raios-X, sendo o primeiro coletado em uma fonte convencional de raios-X e o segundo comum feixe proveniente de luz sincroton- capítulo 6. A análise da qualidade e comparação dos conjuntos de dados - capítulo 7 - indicou qual conjunto seria utilizado nas etapas seguintes da determinação da estrutura da PGI-hum. Para resolução da estrutura cristalográfica da PGI-hum foi utilizado o método de substituição molecular com base na estrutura homóloga da PGI de coelho - capítulo 8. O refinamento estrutural da PGI resultou em uma estrutura com 2.1 'ANGSTRON' de resolução e fatores ) R e R free satisfatórios - capítulo 9. Uma análise estrutural preliminar é apresentada indicando uma geometria adequada para a proteína e descrevendo as principais características estruturais desta enzima em comparação com a PGI de coelho
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 09.03.2001
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      CORDEIRO, Artur Torres; THIEMANN, Otávio Henrique. Determinação da estrutura cristalográfica por difração de raios-X da enzima glicose-6-fosfato isomerase humana. 2001.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2001. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-15092008-094249/ >.
    • APA

      Cordeiro, A. T., & Thiemann, O. H. (2001). Determinação da estrutura cristalográfica por difração de raios-X da enzima glicose-6-fosfato isomerase humana. Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-15092008-094249/
    • NLM

      Cordeiro AT, Thiemann OH. Determinação da estrutura cristalográfica por difração de raios-X da enzima glicose-6-fosfato isomerase humana [Internet]. 2001 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-15092008-094249/
    • Vancouver

      Cordeiro AT, Thiemann OH. Determinação da estrutura cristalográfica por difração de raios-X da enzima glicose-6-fosfato isomerase humana [Internet]. 2001 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-15092008-094249/


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