Expressão em levedura e purificação da 'Ca POT. 2+'-ATPase do retículo sarcoplasmático de coelho (2000)
- Authors:
- Autor USP: REIS, EDUARDO MORAES REGO - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: BIOQUÍMICA; PROTEINAS (METABOLISMO)
- Language: Português
- Abstract: Este estudo descreve um novo método para a produção da 'Ca POT. 2+'-ATPase do retículo sareoplasmático de coelho em levedura utilizando um vetor de expressão regulado por choque térmico. Após solubilização das membranas de levedura com lisofosfatidilcolina, a introdução de um "tag" de 6 histidinas na extremidade amino-ternúnal da 'Ca POT. 2+'-ATPase permitiu a sua purificação por cromatografia de afinidade utilizando uma resina carregada com níquel. Utilizando essa estratégia, foi possível obter frações enriquecidas em até 75% de 'Ca POT. 2+'-ATPase recombinante, algo não descrito ainda na literatura. A 6xHis 'Ca POT. 2+'-ATPase solubilizada em LPC e purificada em coluna de níquel se mantém estável desde que seja introduzido DOPC juntamente com o detergente nas etapas de lavagem e eluição. Nessas condições, a enzima purificada possui elevada atividade ATPásica cálcio-dependente (1.5-2.0 gmo]Vmg proteína.niin) durante vários minutos de reação. A titulação da atividade ATPásica em função do cálcio livre demonstrou que a 6xHis 'Ca POT. 2+'-ATPase purificada possui alta afinidade para o íon ('K IND. 0,5'= 0. 15 'mü'M) e manteve uma forte cooperatividade na ativação por cálcio ('N IND. H', =2.07). A quantidade e o grau de pureza obtidos são suficientes para permitir a caracterização bioquímica e espectroscópica de mutantes pontuais da 'Ca POT. 2+'-ATPase já construídos e expressos em levedura. A conversão da energia presente em ligações químicas em gradienteeletroquímico é um tema central da bioenergética. Espera-se que o estudo dos mutantes pontuais de triptofano da 'Ca POT. 2+'-ATPase gerados nesse trabalho contribua para uma melhor compreensão do mecanismo de acoplamento entre a hidrólise de ATP e o transporte vetorial de íons nesse modelo de estudo de proteínas de transporte
- Imprenta:
- Data da defesa: 12.09.2000
-
ABNT
REIS, Eduardo Moraes. Expressão em levedura e purificação da 'Ca POT. 2+'-ATPase do retículo sarcoplasmático de coelho. 2000. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2000. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-14082008-111100/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Reis, E. M. (2000). Expressão em levedura e purificação da 'Ca POT. 2+'-ATPase do retículo sarcoplasmático de coelho (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-14082008-111100/ -
NLM
Reis EM. Expressão em levedura e purificação da 'Ca POT. 2+'-ATPase do retículo sarcoplasmático de coelho [Internet]. 2000 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-14082008-111100/ -
Vancouver
Reis EM. Expressão em levedura e purificação da 'Ca POT. 2+'-ATPase do retículo sarcoplasmático de coelho [Internet]. 2000 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-14082008-111100/ - Validação molecular de novos transcritos expressos em câncer de pâncreas
- Effects of Kunitz type inhibitor on gene expression and on microenvironment of normal and tumoral cells
- O que é epigenética?
- Novos IncRNAs intergênicos em tumores de pâncreas
- Kunitz type inhibitor (rKTI) induces modulation on genes expression inhibits proteasome complex and cause death of cancer cells
- A new tick Kunitz type inhibitor, Amblyomin-X, induces tumor cell death by modulating genes related to the cell cycle and targeting the ubiquitin-proteasome system
- Efeito da desmetilação do DNA sobre a expressão de um RNA não codificador hospedado no lócus do gene THBS-1
- Caracterização estrutural e funcional de um RNA não-codificador longo expresso no locus do gene APP
- Genes regulated by DNA methylation are involved in distinct phenotypes during melanoma progression and are prognostic factors for patients
- Quimiorresistência e a possibilidade de revertê-la no tratamento do câncer de pâncreas
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
