Efeitos de modificações químicas sobre propriedades enzimáticas, farmacológicas e antigênicas de miotoxinas isoladas (2000)
- Authors:
- Autor USP: ESCARSO, SILVIA HELENA ANDRIAO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBQ
- Assunto: BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: O fracionamento do veneno de Bothrops jararacussu em CM-Sepharose, pH 8,0, para purificação das bothropstoxinas (BthTX) foi realizado em uma única etapa cromatográfca de forma fácil e rápida. O perfil cromatográfico apresentou 6 frações, das quais as frações J-IV e J-V correspondem, respectivamente, às miotoxinas BthTX-II e BthTX-I. Estas, quando submetidas à eletroforese em gel de poliacrilamida para proteínas básicas, apresentaram alto grau de homogeneidade. O peso molecular, determinado através da eletroforese em gel de poliacrilamida com agente desnaturante, foi ao redor de 14.000, para ambas. Após a purificação e caracterização química, as miotoxinas foram submetidas a diferentes testes biológicos, "in vivo" (liberação da enzima creatina cinase, indução de edema e letalidade) e "in vitro" (atividade fosfolipásica, hemolítica indireta, anticoagulante e lítica sobre lipossomos). Posteriormente estas miotoxinas foram submetidas a modificações químicas nos resíduos de: 1) His, pelo brometo de p-bromofenacila (BPB) a pelo Rose Bengal (RB); 2) Tyr, pelo fluoreto 2-nitrobenzenesulfonil (NBSF); a 3) Trp, pelo cloreto de o-nitrofenilsulfenil (NPSC). Estas miotoxinas modificadas foram utilizadas como modelos para se estudar a relação estrutura função das fosfolipases A2 enzimaticamente ativas (Asp49) ou não (Lys49). A atividade miotóxica da BthTX-I, uma PLA2 Lys49, após modificação pelo BPB, RB, NBSF a NPSC, foi reduzida para 50%, 20%, 25% e 35%, respectivamente. Asatividades indutora de edema e lítica sobre lipossomos foram reduzidas em menor grau para estas modificações. O tratamento da BthTX-II, uma PLA2 Asp49, com BPB aboliu quase que completamente as atividades catalítica, hemolítica indireta, anticoagulante a miotóxica, enquanto que a indução de edema e a ruptura de lipossomos foram reduzidas em cerca de 50% e 20%, respectivamente. A letalidade causada pela BthTX-I ou II foi intensamente reduzida após o ) tratamento com BPB ou RB, e parcialmente com NBSF ou NPSC. BthTX-I e II tanto nativa como modificada, migraram similarmente na eletroforese "charge-shift", exceto as formas foto-oxidadas com RB. Anticorpos contra BthTX-I ou II foram produzidos e a reação cruzada destes com as suas respectivas toxinas nativas e modificadas não apresentaram nenhuma diferença. Com base nestes resultados pode-se verificar que as modificações químicas das miotoxinas diminuem o seu potencial tóxico mas não alteram a sua antigenicidade. Com o veneno bruto ocorreu que a toxicidade foi diminuida de forma parcial sem perda da antigenicidade quando o veneno bruto foi modificado com BPB e uma diminuição mais significativa da toxicidade com diminuição na antigenicidade quando modificado com RB. Isso mostra a possibilidade de se utilizarem formas de atenuação da toxicidade para o veneno bruto e para miotoxinas, principais responsáveis pelos danos causados por picada de serpente do gênero Bathrops, e que a longo prazo, estes estudos podem serempregados como formas alternativas para se aumentar a quantidade de veneno inoculado nos animais (cavalo) para produção de soro anti-ofídico, assim como, apresentar formas de se enriquecer o veneno bruto com as miotoxinas atenuadas sem que haja prejuízo para o animal inoculado e, consequentemente, aumentar os títulos de anticorpos contra as mitoxinas no soro antiofídico
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2000
- Data da defesa: 09.06.2000
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ABNT
ESCARSO, Sílvia Helena Andrião. Efeitos de modificações químicas sobre propriedades enzimáticas, farmacológicas e antigênicas de miotoxinas isoladas. 2000. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2000. . Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Escarso, S. H. A. (2000). Efeitos de modificações químicas sobre propriedades enzimáticas, farmacológicas e antigênicas de miotoxinas isoladas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Escarso SHA. Efeitos de modificações químicas sobre propriedades enzimáticas, farmacológicas e antigênicas de miotoxinas isoladas. 2000 ;[citado 2024 abr. 19 ] -
Vancouver
Escarso SHA. Efeitos de modificações químicas sobre propriedades enzimáticas, farmacológicas e antigênicas de miotoxinas isoladas. 2000 ;[citado 2024 abr. 19 ] - Isolamento e caracterizacao quimica parcial de um fator coagulante do veneno de bothrops jararacussu
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