Estudo das variações inter- e intra-específicas de Eimeria spp. de galinha doméstica através do polimorfismo de DNA amplificado randomicamente (RAPD) (1999)
- Authors:
- Autor USP: FERNANDEZ, SANDRA - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPT
- Subjects: PATOLOGIA VETERINÁRIA; EIMERIA; COCCIDIOSE; AVES DOMÉSTICAS
- Language: Português
- Abstract: A coccidiose da galinha doméstica é uma doença intestinal causada por protozoários intracelulares obrigatórios do gênero Eimeria. Sete diferentes espécies são consideradas patogênicas, causando grandes prejuízos na indústria avícola. Os métodos convencionais de identificação de esoécies de Eimeria spp. são trabalhosos e podem apresentar resultados duvidosos, sendo que a discriminação de cepas exige métodos ainda mais complexos. A identificação precisa de espécies e cepas em nosso país é uma condição importante para se ter um melhor controle da coccidiose. O objetivo deste trabalho foi padronizar uma técnica para a discriminação de espécies e isolados brasileiros, baseada no polimorfismo do DNA amplificado randomicamente (RAPD). Os ensaios foram realizados empregando-se as sete espécies de Eimeria que infectam a galinha doméstica, e várias cepas distintas de E. acervulina, E. tenella e E. maxima. Foram testados diferentes métodos para purificação de DNA, assim como parâmetros para as reações de RAPD. Os melhores resultados foram obtidos com 25 ng de DNA, 15 ng de primer, 1 U de Taq DNA polimerase, 1,5 mM MgCl'ANT.2' e 250 'mü'm de dNTP em um volume de 25 'mü'L. Após uma denaturação inicial a 94° por 5 minutos, a amplificação foi feita em um termociclador através de 40 ciclos de 1 min a 94°C, 1 min a 40°C e 1 min e 30 s a 72°C, finalizando com uma extensão a 72°C por 8 minutos. O material amplificado foi visualizado através de eletroforese em gel de agarose2% corado por brometo de etídeo. Para a padronização buscou-se encontrar um perfil de RAPD com 3 a 10 fragmentos de 300 a 2000 pb. Foram testados como primers 165 diferentes oligonucleotídeos, sendo que 61 permitiram discriminar as três espécies mais prevalentes de Eimeria, e 39 detectaram variações intra-específicas entre os seis isolados brasileiros de E. acervulina. Oito primers também foram testados frente a dois isolados de E. maxima e cinco de ) E. tenella, sendo que três geraram bandas diferenciais para os isolados de E. maxima e dois geraram marcadores moleculares diferenciais para E. tenella. Além disso, 13 primers foram testados para a diferenciação das sete espécies de Eimeria, sendo que oito permitiram uma completa diferenciação intra-específica. Um total de 10 marcadores moleculares compreendendo bandas específicas para cinco espécies de Eimeria foram clonados e seqüenciados. Esses marcadores poderão ser úteis para o desenvolvimento de ensaios espécie-específicos, assim como para estudos de mapeamento genômico no futuro
- Imprenta:
- Data da defesa: 19.11.1999
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ABNT
FERNANDEZ, Sandra. Estudo das variações inter- e intra-específicas de Eimeria spp. de galinha doméstica através do polimorfismo de DNA amplificado randomicamente (RAPD). 1999. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 1999. . Acesso em: 14 nov. 2024. -
APA
Fernandez, S. (1999). Estudo das variações inter- e intra-específicas de Eimeria spp. de galinha doméstica através do polimorfismo de DNA amplificado randomicamente (RAPD) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Fernandez S. Estudo das variações inter- e intra-específicas de Eimeria spp. de galinha doméstica através do polimorfismo de DNA amplificado randomicamente (RAPD). 1999 ;[citado 2024 nov. 14 ] -
Vancouver
Fernandez S. Estudo das variações inter- e intra-específicas de Eimeria spp. de galinha doméstica através do polimorfismo de DNA amplificado randomicamente (RAPD). 1999 ;[citado 2024 nov. 14 ]
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