Regulação da atividade da proteína quinase dependente de RNA (PKR) de linfócitos humanos com RNA de animais imunizados com peptídeo sintético do HIV-1 (2000)
- Authors:
- Autor USP: SOUZA, LILIANA RODRIGUES DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBQ
- Assunto: BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: A proteína quinase dependente de RNA (PKR), uma quinase serinatreonina específica, é um dos mediadores importantes da atividade anti-viral dos interferons (IFNs) 'alfa' e 'beta'. Os estudos sobre a PKR permaneceram, durante muitos anos, restritosao âmbito do mecanismo de ação dos IFNs 'alfa' e 'beta', acreditando-se que somente o RNA de origem viral era capaz de ativar esta proteína quinase. Os dados recentes da literatura mostram que a PKR está também envolvida na regulação datranscrição e tradução, bem como na transdução de sinal, apoptose a controle do ciclo celular. O fato de participar da regulação de importantes funções celulares sugere que a atividade da PKR possa ser também modulada por RNAs celulares.Recentemente, foi demonstrado que o RNA regulador de células 3T3, não infectadas por vírus, é capaz de ativar a PKR. Verificou-se ainda que esta proteína quinase ativa o fator de transcrição NF-'capa' B através da fosforilação do seu imbidor1-'capa' B 'alfa'. É fato conhecido que os promotores de vários genes, entre os quais os genes do IFN-'gaa', TNF e outras citocinas, possuem sítios ('capa'B) de ligação para o NF-'capa'B. Estudos anteriores deste Laboratório mostraram que otratamento de linfócitos humanos com o RNAp9, obtido de orgãos linfóides de animais imunizados com o peptídeo sintético p9 (pol:476-484) do HIV-1, é capaz de induzir linfócitos T citotóxicos e a secreção de IFN-'capa'B. No presentetrabalho,investigamos a possibilidade de que a indução de citotoxicidade a de secreção de IFN-'gama' pelos linfócitos tratados com RNAp9 sejam mediadas pela PKR. Assim, estudamos o efeito do RNAp9 sobre a atividade desta proteína quinase aos ensaios dePKR foram realizados em extratos de linfócitos humanos na presença de ATP ['gama'-POT. 32'], utilizando-se o poli I:C, um ativador clássico da PKR, como controle positivo. O RNA obtido de animais não imunizados (RNA-N) foi utilizado comocontrole ) negativo. O efeito do RNAp9 foi também avaliado em culturas de linfócitos humanos, adicionando-se ortofosfato-'P POT.32' ao meio de cultura. Após os ensaios de PKR, as protemas foram separadas por eletroforese em gel depoliacrilamida e as fosfoproteínas radioativas foram detectadas por autoradiografia, enquanto que a PKR e o I-'capa' B 'alfa' foram identificados por imunoblot. Os resultados obtidos com os extratos celulares mostraram que o RNAp9 é capaz deativar a PKR de linfócitos humanos a que esse efeito é bloqueado pela 2-aminopurina, um inibidor específico da PKR. Nos ensaios de PKR realizados em culturas de linfócitos humanos, verificamos que a ativação da PKR pelo RNAp9 foi acompanhadapelo aumento da fosforilação do 1-KBa. Esse resultado é relevante, pois a fosforilação do I-'CPA' B 'alfa' é um evento crítico para a sua degradação e o NF-'capa' B , livre do seu inibidor, migra para o núcleo a se liga aos promotores com sítios'capa' B, induzindo a expressão degenes específicos, entre os quais genes de várias citocinas. Portanto, os resultados deste estudo sugerem que os efeitos biológicos (citotoxicidade a secreção de IFN-'gama') observados nos linfócitos humanostratados como RNAp9 sejam mediados pela PKR a NF-'capa' B e que o RNAp9 atuaria como um RNA regulador
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2000
- Data da defesa: 18.02.2000
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ABNT
SOUZA, Liliana Rodrigues de. Regulação da atividade da proteína quinase dependente de RNA (PKR) de linfócitos humanos com RNA de animais imunizados com peptídeo sintético do HIV-1. 2000. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2000. . Acesso em: 01 nov. 2024. -
APA
Souza, L. R. de. (2000). Regulação da atividade da proteína quinase dependente de RNA (PKR) de linfócitos humanos com RNA de animais imunizados com peptídeo sintético do HIV-1 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Souza LR de. Regulação da atividade da proteína quinase dependente de RNA (PKR) de linfócitos humanos com RNA de animais imunizados com peptídeo sintético do HIV-1. 2000 ;[citado 2024 nov. 01 ] -
Vancouver
Souza LR de. Regulação da atividade da proteína quinase dependente de RNA (PKR) de linfócitos humanos com RNA de animais imunizados com peptídeo sintético do HIV-1. 2000 ;[citado 2024 nov. 01 ]
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