Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina (1999)
- Authors:
- Autor USP: BARUFFI, MARCELO DIAS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RPM
- Assunto: IMUNOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: MNCF ("Macrophage-derived Neutrophil Chemotactic Factor") é uma lectina indutora da migração de neutrófilos, isolada por adsorção à D-galactose imobilizada do sobrenadante de monocamadas de macrófagos peritoneais de rato, estimulados com LPS. Sua atividade tem pelo menos duas peculiaridades: estar manifesta mesmo quando ensaiada em animais pré-tratados com dexametasona a ser inibida em presença de D-galactose. A observação que MNCF também é produzido por células de linhagem macrofágica de camundongos e a produção de anticorpo monoclonal anti-MNCF, descritas neste, trabalho, viabilizaram a abordagem de novos aspectos nas investigações sobre o MNCF, referentes às características fisicas da molécula, ao estabelecimento de analogias com proteínas conhecidas, à interação com ligante na superficie do neutrófilos e à ligação com glicoproteína da matriz extracelular. MNCF, isolado por cromatografia de afinidade em agarose-D-galactose, a partir do sobrenadante demacrófagos de rato (MNCF-r) ou de células da linhagem P388-D1 de camundongos (MNCF-c), caracteriza-se por ter massa molecular aparente de 69 kDa, pI 6,6-6,8 a sequência de aminoácidos N-terminais (EAHKSEIAHRFKDLG). O MNCF de camundongo tem atividades biológicas similares às do MNCF de rato. MNCF-r a MNCF-c induzem migração de neutrófilos em ambas espécies ensaiadas, ratos a camundongos, mesmo quando esses animais-teste, são pré-tratados com dexametasona; a atividade exercida invivo pelo MNCF-c é inibida em45% na presença de D-galactose. MNCF-r e MNCF-c induzem migração in vitro de neutrófilos humanos, por mecanismo haptotático ; essa atividade é inibida significantemente na presença de Dgalactose. MNCF-r purificado foi utilizado para a produção de anticorpos policlonais a monoclonais em camundongos. Este anticorpo monoclonal, denominado B4.1 reconhece MNCF-r, tem cadeias pesada gama 3 e leve Kappa, foi capaz de asorver a atividade atraente de neutrófilos de ) uma preparação de MNCF-r a de revelar a presença de MNCF ligado a superfície de neutrófilos. A ligação de MNCF-r à superfície de neutrófilos foi analisada por citometria de fluxo, estimando-se um número médio baixo de ligantes por célula. O MNCF-r foi deslocado da superfície de neutrófilos pela adição de D-galactose (0,3 M) ao meio. Constatou-se através de ensaio em microplacas que MNCF-r a MNCF-c ligam-se à laminina, glicoproteína de matriz extracelular, abundante em membrana basal vascular; essa interação é inibida em presença de Dgalactose e pode estar implicada na formação de gradiente haptotatico de MNCF-r/MNCF-c, aparentemente requerido para que fator induza m graçâo de neutrófilos vivo. Com base imuno reatividade cruzada sequência N- terming? alto grau de identidade atividade gica comum estabelecera analogias entre MNCFr/MNCF c proteínas conhecidas. Assim avaliaram-se similaridades e diferenças do MNCF-c com P70 do cérebro de ratos, receptor de lâminina de S aureus galectina-3. O compartilhamento deepitopos ficou evidente todos casos, mas não se constatou correspondência entre MNCF qualquer das proteínas citadas. O conjunto de novas observações feitas sobre MNCF as ferramentas agora disponibilizadas para seu estudo justificam e viabilizam investimento que doravante será feito nos procedimentos de clonagem molecular do fator
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 1999
- Data da defesa: 16.09.1999
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ABNT
BARUFFI, Marcelo Dias. Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina. 1999. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 1999. . Acesso em: 19 mar. 2024. -
APA
Baruffi, M. D. (1999). Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Baruffi MD. Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina. 1999 ;[citado 2024 mar. 19 ] -
Vancouver
Baruffi MD. Novos aspectos da caracterização da lectina de origem macrofágica, MNCF: produção por linhagem de macrófagos de camundongo, analogia co proteínas conhecidas e ligação à superfície de neutrófilos e à laminina. 1999 ;[citado 2024 mar. 19 ] - Degeneration of dystrophic or injured skeletal muscles high expression of Galectin-1
- Human galectin-1 recognition of poly-N-acetyllactosamine and chimeric polysaccharides
- Ligand reduces galectin-1 sensitivity to oxidative inactivation by enhancing dimer formation
- Galectin-1 induces reversible phosphatidylserine exposure at the plasma membrane
- Clonagem, expressão heteróloga e purificação de galectina-1 de camundongo
- Human galectin-1, -2, and -4 induce surface exposure of phosphatidylserine in activated human neutrophils but not in activated T cels
- The sweet-side of leukocytes: galectins as master regulators of neutrophil function
- Galectinas: da ligação a β-galactosídeos ao envolvimento em doenças infecciosas e musculares
- Dimeric galectin-1 induces surface exposure of phosphatidylserine and phagocytic recognition of leukocytes without inducing apoptosis
- Vivência acadêmica no setor de Análises Clínicas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Rbeirão Preto
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