Clonagem e seqüenciamento do gene da enzima L-glutamina: D-frutose-6-fosfato amidotranferase de Blastocladiella emersonii (1999)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, JOSÉ ANTONIO NOVAES DA - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; ENZIMAS (METABOLISMO)
- Language: Português
- Abstract: A síntese da parede celular de quitina, que ocorre durante o encistamento de zoósporos do fungo Blastocladiella emersonii, é regulada pela enzima amidotransferase, que catalisa a conversão da L-glutamina e D-frutose-6-fosfatoemD-glicosamina-6-fosfato e glutamato. A glicosamina-6-6fosfato é modificada levando à formação de UDP-N-acetilglicosamina (UDP-G1cNAc), produto final da via das hexosaminas e inibidor alostérico da enzima de organismos eucorióticos. Em B. emersonii a amidotransferase existe como duas formas interconversíveis pela fosforilação de resíduos de serina, sendo que a forma fosforilada é sensível ao inibidor. A diminuição na concentração de UDP-G1cNAc relaxa a inibição que, acoplada à desfosforilação, permite um fluxo contínuo de síntese de hexosaminas. Neste trabalho nos propusemos a isolar/seqüenciar o gene e/ou cDNA da amidotransferase. Utilizando um par de oligonucluotídeos com seqüências derivadas a partir de regiões conservadas entre amidotransferases já clonadas, foi possível obter, através da PCR, um fragmento de 340 pb correspondente a um segmento do gene. Este foi utilizado na varredura de uma biblioteca de cDNA de B. emersonii, isolando-se um cDNA de0,8 kb, cuja seqüência de aminoácidos deduzida corresponde a porção carboxi-terminal da enzima. A análise do padrão de expressão do mRNA da amidotransferase mostrou que seu tamanho aproximado equivale a 2,5 kb e apresenta níveis máximos de acúmulodurante a fase de esporulação e crescimento. Durante a fase final da esporulação os níveis deste mRA diminuem, atingindo níveis não detectáveis nos zoósporos
- Imprenta:
- Data da defesa: 04.05.1999
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ABNT
SILVA, José Antonio Novaes da. Clonagem e seqüenciamento do gene da enzima L-glutamina: D-frutose-6-fosfato amidotranferase de Blastocladiella emersonii. 1999. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 1999. . Acesso em: 20 abr. 2024. -
APA
Silva, J. A. N. da. (1999). Clonagem e seqüenciamento do gene da enzima L-glutamina: D-frutose-6-fosfato amidotranferase de Blastocladiella emersonii (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Silva JAN da. Clonagem e seqüenciamento do gene da enzima L-glutamina: D-frutose-6-fosfato amidotranferase de Blastocladiella emersonii. 1999 ;[citado 2024 abr. 20 ] -
Vancouver
Silva JAN da. Clonagem e seqüenciamento do gene da enzima L-glutamina: D-frutose-6-fosfato amidotranferase de Blastocladiella emersonii. 1999 ;[citado 2024 abr. 20 ]
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