Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura (1999)
- Authors:
- Autor USP: FERREIRA, ALESSANDRA DE LA ROCQUE - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QFL
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; LEVEDURAS
- Language: Português
- Abstract: Aqui apresentamos a construção e caracterização funcional de uma proteína de fusão da cálcio-ATPase na qual foi introduzido na porção amino-terminal, por técnicas moleculares, um domínio de afinidade por cátions metálicos. Este domínio é constituído de 24 aminoácidos, dentre os quais estão seis histidinas consecutivas. A introdução desta seqüência de hexa-histidina amino-terminal na Cálcio-ATPase aumentou o nível de expressão desta proteína cerca de três a cinco vezes quando comparado com o nível de expressão da Cálcio-ATPase nativa em levedura (a Hexa-His-Cálcio-ATPase obtida é 1 a 3% das proteínas totais do lisado de levedura). Estes 24 aminoacidos acrscentados na porção amino-terminal da proteína não modificaram significativamente a localização sub-celular da Hexa-His-Cálcio-ATPase em relação a Cálcio-ATPase nativa de músculo expressada em levedura. Ambas são retidas no retículo endoplasmático. Por fim, a adição destes 24 aminoácidos parece não afetar a funcionalidade da enzima, já que esta mantem a capacidade de formar fosfoenzima na presença de ATP e cálcio, e apresentar "tumover" rápido da fosfoenzima, similar ao da ATPase nativa nas mesmas condições. A Hexa-His-Cálcio-ATPase é capaz de se ligar à resina contendo Niquel-NTA, ligação esta reversível na presença de imidazol, indicando qua a porção Hexa-histidina está voltada para o meio aquoso e acessível ao íon metálico, não sendo encoberta pelo dobramento nativo da enzima
- Imprenta:
- Data da defesa: 29.01.1999
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ABNT
FERREIRA, Alessandra. Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura. 1999. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 1999. . Acesso em: 04 mar. 2026. -
APA
Ferreira, A. (1999). Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Ferreira A. Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura. 1999 ;[citado 2026 mar. 04 ] -
Vancouver
Ferreira A. Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura. 1999 ;[citado 2026 mar. 04 ]
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