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Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura (1999)

  • Authors:
  • USP affiliated author: FERREIRA, ALESSANDRA DE LA ROCQUE - IQ
  • School: IQ
  • Sigla do Departamento: QFL
  • Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; LEVEDURAS
  • Language: Português
  • Abstract: Aqui apresentamos a construção e caracterização funcional de uma proteína de fusão da cálcio-ATPase na qual foi introduzido na porção amino-terminal, por técnicas moleculares, um domínio de afinidade por cátions metálicos. Este domínio é constituído de 24 aminoácidos, dentre os quais estão seis histidinas consecutivas. A introdução desta seqüência de hexa-histidina amino-terminal na Cálcio-ATPase aumentou o nível de expressão desta proteína cerca de três a cinco vezes quando comparado com o nível de expressão da Cálcio-ATPase nativa em levedura (a Hexa-His-Cálcio-ATPase obtida é 1 a 3% das proteínas totais do lisado de levedura). Estes 24 aminoacidos acrscentados na porção amino-terminal da proteína não modificaram significativamente a localização sub-celular da Hexa-His-Cálcio-ATPase em relação a Cálcio-ATPase nativa de músculo expressada em levedura. Ambas são retidas no retículo endoplasmático. Por fim, a adição destes 24 aminoácidos parece não afetar a funcionalidade da enzima, já que esta mantem a capacidade de formar fosfoenzima na presença de ATP e cálcio, e apresentar "tumover" rápido da fosfoenzima, similar ao da ATPase nativa nas mesmas condições. A Hexa-His-Cálcio-ATPase é capaz de se ligar à resina contendo Niquel-NTA, ligação esta reversível na presença de imidazol, indicando qua a porção Hexa-histidina está voltada para o meio aquoso e acessível ao íon metálico, não sendo encoberta pelo dobramento nativo da enzima
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 29.01.1999

  • How to cite
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    • ABNT

      FERREIRA, Alessandra; VERJOVSKI-ALMEIDA, Sergio. Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura. 1999.Universidade de São Paulo, São Paulo, 1999.
    • APA

      Ferreira, A., & Verjovski-Almeida, S. (1999). Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura. Universidade de São Paulo, São Paulo.
    • NLM

      Ferreira A, Verjovski-Almeida S. Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura. 1999 ;
    • Vancouver

      Ferreira A, Verjovski-Almeida S. Construção de cálcio-ATPase SERCA 1 de coelho modificada com hexa-histidina amino terminal e caracterização de sua expressão em levedura. 1999 ;

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