Análise funcional do gene XIST na manutenção do estado inativo do cromossomo X-INATIVO (Xi) (1999)
- Authors:
- Autor USP: VASQUES, LUCIANA DOS REIS - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIO
- Assunto: GENÉTICA
- Language: Português
- Abstract: Foi objetivo deste trabalho estudar a função do gene XIST no processo de manutenção da inativação do cromossomo X inativo (Xi). Para tanto, foi desenvolvido um sistema celular e dois sistemas de inativação do gene XIST (RNA-AS e ribozimas). Parao desenvolvimento do sistema celular, foram utilizados fibroblastos oriundos de uma mulher heterozigota para uma mutação no gene HPRT (código 1661). Este gene, envolvido no metabolismo de purinas, permitiu a seleção de uma subpopulação comfenótipo 'HPRT POT.-'que apresenta o mesmo cromossomo Xi. Assim a possível reativação deste cromossomo nestas células poderia ser verificada pela reversão do fenótipo 'HPRT POT.-' para 'HPRT POT.+'.Uma vez que os fibroblastos primários entraramem senescência durante o processo de transfecção dos vetores para inativação do gene XIST, estas células foram transfectadas com o antígeno T do SV40. Isto garantiu uma maior sobrevida das células em cultura. Os "pools" celulares obtidos pelosistema anti-senso para cada tipo de vetor, não demonstraram inativação do gene-alvo. Por outro lado, um clone, pRX22, expressando uma ribozima dirigida à região '5 POT.-' do RNA do gene XIST, apresentou 5% da expressão deste gene quandocomparado às células-controle. A análise da reativação do cromossomo Xi foi realizada no clone pRX22. Devido às dificuldades de interpretação dos resultados, a caracterização citogenética foi realizada nas linhagens-controle e pRX22. Atravésdesta análise, foi determinado que aslinhagens apresentavam-se hipotetraplóides e que a quantidade de cromossomo X presentes nas linhagens-controle (maioria 4 cromossomos X) era diferente da encontrada em pRX22 (maioria 3 cromossomos X). Destaforma, não foi possível comparar as duas linhagens molecular e citogeneticamente quanto à atividade do cromossomo Xi. Além disso, devido às diferenças de conteúdo gênico entre as linhagens 'HPRT POT.-'SV40-3 e pRX22, não foi possível uma quantificação rigorosa da atividade da ribozima. No entanto, pôde-se concluir que esta apresentou alguma atividade catalítica sobre o RNA do gene XIST
- Imprenta:
- Data da defesa: 13.04.1999
-
ABNT
VASQUES, Luciana dos Reis; PEREIRA, Lygia da Veiga. Análise funcional do gene XIST na manutenção do estado inativo do cromossomo X-INATIVO (Xi). 1999.Universidade de São Paulo, São Paulo, 1999. -
APA
Vasques, L. dos R., & Pereira, L. da V. (1999). Análise funcional do gene XIST na manutenção do estado inativo do cromossomo X-INATIVO (Xi). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Vasques L dos R, Pereira L da V. Análise funcional do gene XIST na manutenção do estado inativo do cromossomo X-INATIVO (Xi). 1999 ; -
Vancouver
Vasques L dos R, Pereira L da V. Análise funcional do gene XIST na manutenção do estado inativo do cromossomo X-INATIVO (Xi). 1999 ; - Constraints on cosmology from the ages of galactic globular clusters
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