Inovação no processo de fracionamento de plasma humano através do uso de cromatografia líquida de pseudoafinidade (2016)
- Authors:
- Autor USP: FELICIANO, GABRIEL PINNA - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Subjects: PROTEINAS; PLASMA; ESPECTROMETRIA DE MASSA; CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
- Keywords: Anion-exchange; Cromatografia líquida; FIX; FIX; FVIII; FVIII; Liquid chromatography; Proteínas dependentes de vitamina K; Pseudo-affinity; Pseudoafinidade; Troca aniônica; Vitamin K dependent proteins
- Language: Português
- Abstract: Neste trabalho mostramos que o método de purificação empregando a coluna ANX Sepharose FF, alternando eluições com CaCl2 (pseudoafinidade) e NaCl, permite obter concentrados do complexo protrombínico e do fator VIII em uma etapa cromatográfica. Testamos as colunas ANX e Q Sepharose FF, monolito QA e membrana Sartobind Q e os tampões citrato, MES e Bis-Tris. Empregando a ANX Sepharose FF e o tampão citrato as proteínas do complexo protrombínico eluiram com CaCl2 25 mM e o FVIII com NaCl 500mM. A recuperação da atividade de FVIII foi de cerca de 60% e o fator de purificação de 220 vezes. Na fração contendo as proteínas do complexo protrombínico foram identificadas por espectrometria de massas a presença de fibrinogênio, proteína C4 do complemento e C4b Binding Protein. A análise das frações mostra que a presença destas proteínas não é devido à variação da concentração de CaCl2, possivelmente se deve à difusão lenta destas através da resina. Mais de 99% das proteínas do plasma não são adsorvidas na coluna e podem ser purificadas em etapas posteriores
- Imprenta:
- Data da defesa: 27.10.2016
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ABNT
FELICIANO, Gabriel Pinna. Inovação no processo de fracionamento de plasma humano através do uso de cromatografia líquida de pseudoafinidade. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-21022017-113927/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Feliciano, G. P. (2016). Inovação no processo de fracionamento de plasma humano através do uso de cromatografia líquida de pseudoafinidade (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-21022017-113927/ -
NLM
Feliciano GP. Inovação no processo de fracionamento de plasma humano através do uso de cromatografia líquida de pseudoafinidade [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-21022017-113927/ -
Vancouver
Feliciano GP. Inovação no processo de fracionamento de plasma humano através do uso de cromatografia líquida de pseudoafinidade [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-21022017-113927/
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