Avaliação metabolômica comparativa in vitro de fármaco candidato ao tratamento de leishmaniose (2016)
- Authors:
- Autor USP: CANUTO, GISELE ANDRÉ BAPTISTA - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QFL
- Subjects: ESPECTROMETRIA DE MASSAS; CROMATOGRAFIA; LEISHMANIA INFANTUM; PRODUTOS NATURAIS; QUIMIOMETRIA
- Language: Português
- Abstract: A leishmaniose é uma doença negligenciada provocada por parasitas do gênero Leishmania, que ocorre em mais de 90 países no mundo, afetando milhões de pessoas. A doença é tratável, mas ainda não tem cura, e o arsenal terapêutico comumente utilizado é limitado, e consiste do uso de fármacos de alta toxicidade. Sendo assim, a busca por novas terapias tem sido encorajada e o uso de compostos ativos isolados de produtos naturais, como plantas, tem se mostrado eficaz. Para uso futuro destes princípios ativos no tratamento, faz-se necessário o entendimento do seu mecanismo de ação. As ciências "ômicas", mais especificamente a metabolômica, que é a análise comparativa dos metabólitos alterados em um sistema biológico após intervenção externa, tem sido bastante aplicada com este objetivo. A abordagem metabolômica é multidisciplinar e as análises são realizadas com auxílio de plataformas analíticas modernas, como as técnicas de separação acopladas a espectrometria de massas (MS). Para tratamento dos dados são utilizadas ferramentas estatísticas avançadas, e as substâncias alteradas são correlacionadas com rotas metabólicas. Neste trabalho, o mecanismo de ação em Leishmania infantum da substância ativa (metildihidrodieugenol B) isolada da planta Nectandra leucantha, foi avaliado por abordagem metabolômica global, com multiplataforma de análise (cromatografia gasosa e líquida em fase reversa hifenadas, GC-MS e RPLC-MS, respectivamente). Otimizações de preparo de amostra, extração, e derivatização para GC-MS, para obter o maior número possível de metabólitos foram realizadas nas amostras em estudo. Promastigotas de L. infantum foram crescidos em meio de cultura e após 72 h foram tratados com metildihidrodieugenol B (na concentração de 58.18 µg x m ‘L POT.-1’); passadas 48 h de tratamento, a ação enzimática foi interrompida, as células lavadas e congeladas paraanálise posterior. Metanol:água (1:1) e metanol 100% foram utilizados como solventes extratores para acessar os metabólitos intracelulares nas análises por GC-MS e RPLC-MS, respectivamente. Derivatização com O-metoxiamina em piridina (15 mg x m ‘L POT.-1’) à temperatura ambiente por 90 min, seguida de sililação com BSTFA + 1% TMCS por 30 min à 40 ºC foi realizada para tornar voláteis e estáveis os metabólitos para análise por GC-MS. Os resultados de ambas plataformas de análise apontou grandes diferenças entre os grupos de amostras tratadas e não tratadas com a substância ativa, e os metabólitos alterados com significância estatística foram correlacionados com o metabolismo de Leishmania. Diferentes aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos, glicerolipídeos e fosfoslipídeos foram encontrados, em sua maioria, diminuídos com o tratamento. Devido a complexidade do metabolismo do parasita e a grande diversidade dos metabólitos alterados, um mecanismo de ação multi-target pode ser atribuído ao dímero de fenilpropanoide. Mudanças no metabolismo da glicólise e gluconeogênese são destacadas, indicando alterações nas fontes de energia da célula. Modificações na composição lipídica da membrana plasmática do parasita também foram observadas, sugerindo variações em sua flexibilidade e fluidez. Os resultados obtidos são preliminares, mas muito importantes para dar o primeiro passo na elucidação da ação desta substância no tratamento da leishmaniose, pleiteando a busca por novas terapias
- Imprenta:
- Data da defesa: 03.06.2016
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ABNT
CANUTO, Gisele André Baptista. Avaliação metabolômica comparativa in vitro de fármaco candidato ao tratamento de leishmaniose. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-14092016-090130/. Acesso em: 20 set. 2024. -
APA
Canuto, G. A. B. (2016). Avaliação metabolômica comparativa in vitro de fármaco candidato ao tratamento de leishmaniose (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-14092016-090130/ -
NLM
Canuto GAB. Avaliação metabolômica comparativa in vitro de fármaco candidato ao tratamento de leishmaniose [Internet]. 2016 ;[citado 2024 set. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-14092016-090130/ -
Vancouver
Canuto GAB. Avaliação metabolômica comparativa in vitro de fármaco candidato ao tratamento de leishmaniose [Internet]. 2016 ;[citado 2024 set. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-14092016-090130/
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