Expressão, purificação e estudos da ferroquelatase de Bacillus subtilis (2015)
- Authors:
- Autor USP: PAGANELLI, MARCELLA OLIVA - IQSC
- Unidade: IQSC
- Assunto: QUÍMICA ORGÂNICA
- Language: Português
- Abstract: A cor vermelha brilhante característica do presunto Parma é resultante, principalmente, do pigmento Zinco-protoporfirina IX (ZnPP). A ZnPP é formada a partir da mioglobina por uma reação de transmetalação, catalisada pela ferroquelatase (FECH), em que o íon de Fe(II) coordenado ao grupo heme é substituído por íons Zn(II). O presunto Parma apresenta uma maior estabilidade oxidativa em relação aos demais produtos cárneos curados além de não conter nitrito e nitrato e, portanto, são considerados mais saudáveis. A utilização da FECH no processamento de carnes curadas pode permitir a produção de produtos cárneos curados mais saudáveis e em menor tempo. No presente trabalho a proteína ferroquelatase de Bacillus subtilis (BsFECH) foi expressa em células de E. coli BL21(DE3), purificada por cromatografia de afinidade ao níquel e exclusão por tamanho e caracterizada por dicroísmo circular, emissão de fluorescência do triptofano e cromatografia de exclusão por tamanho analítico. Em termos de estabilidade foi encontrado que altas concentrações de sal aumentam a estabilidade da proteína frente aos agentes denaturantes ureia e temperaturaA BsFECH produzida é capaz de ligar-se ao substrato modelo de porfirina TPPS, conforme verificado por espectroscopia de UV-Vis, com uma Ka = 3,8x105 M e é capaz de se associar à metamioglobina, conforme verificado por reação de cross-linking com dissuccinimidil suberato e avaliado por SDS-PAGE. A BsFECH aumenta significativamente a taxa de inserção de íons de zinco na TPPS e mostra uma cinética de saturação com uma constante de ligação aparente de Zn(II) ao complexo [BsFECH-TPPS] de 1,3x104 M e uma constante de primeira ordem de 6,6x10-1 s-1 para a dissociação do complexo ternário. A reação de troca ferro/zinco na mioglobina catalisada pela BsFECH é facilitada pela proteólise limitada da mioglobina com pepsina que abre um caminho de reação para a troca metálica com base na interação proteína-proteína entre o fragmento globina da mioglobina e a BsFECH
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2015
- Data da defesa: 24.07.2015
-
ABNT
PAGANELLI, Marcella Oliva. Expressão, purificação e estudos da ferroquelatase de Bacillus subtilis. 2015. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-05102015-093500/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Paganelli, M. O. (2015). Expressão, purificação e estudos da ferroquelatase de Bacillus subtilis (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-05102015-093500/ -
NLM
Paganelli MO. Expressão, purificação e estudos da ferroquelatase de Bacillus subtilis [Internet]. 2015 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-05102015-093500/ -
Vancouver
Paganelli MO. Expressão, purificação e estudos da ferroquelatase de Bacillus subtilis [Internet]. 2015 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-05102015-093500/ - Novos ingredientes alimentícios a base de proteína e peptídeos aplicados a cor de carnes e biodisponibilidade de íons de cálcio
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