Análise da interação entre o fator de transcrição E74A de Drosophila melanogaster com o módulo cis-regulador (-186/-58) de BhC4-1 no sistema mono-híbrido de levedura (2014)
- Autores:
- Autor USP: FRANK, HENRIQUE OLIVEIRA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Assuntos: EXPRESSÃO GÊNICA; DNA; DROSOPHILA
- Idioma: Português
- Resumo: Este trabalho insere-se na linha de pesquisa do laboratório que visa contribuir para investigação dos mecanismos reguladores de expressão gênica em metazoários. Especificamente, os resultados obtidos contribuem para a caracterização molecular dos mecanismos que regulam a expressão do gene de pufe de DNA BhC4-1, expresso e amplificado na glândula salivar no final do desenvolvimento larval do sciarídeo Bradysia hygida. Ensaios funcionais em Drosophila melanogaster identificaram módulos cis-reguladores na região promotora de BhC4-1, que são reconhecidos por fatores trans-ativadores de D. melanogaster, indicativo de conservação de mecanismos controladores da transcrição entre os dois organismos. Dentre esses módulos cis-reguladores foi caracterizado um fragmento de 129 pb (-186/-58) que promove a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula salivar na entrada da metamorfose. Ensaios de perda de função e de superexpressão de E74A, um gene cuja expressão em vários tecidos de D. melanogaster é diretamente induzida pelo aumento dos níveis de ecdisona que precedem a metamorfose, posicionaram o fator de transcrição E74A como um regulador da expressão de BhC4-1-lacZ, na glândula salivar de D. melanogaster. Os resultados obtidos não permitiram determinar se a interação entre o fator trans-ativador E74A e o módulo eis-regulador (-186/-58) ocorre de modo direto ou indireto. De modo a investigar esta questão utilizamos o sistema mono-híbrido de levedura. Inicialmente foi obtida uma linhagem repórter de levedura em cujo genoma foi integrada a construção 129-pHISi-1 (ativador de glândula salivar-gene repórter). Em seguida, a linhagem repórter foi transformada com dois diferentes plasmídeos: a) um plasmídeo contendo a sequência codificadora de E74A clonada em fusão com o domínio de ativação Ga/4; b) um plasmídeo contendo a sequência codificadora de p53m clonada em fusão com o domínio deativação Ga/4. A interação entre a proteína recombinante e o ativador de glândula salivar foi determinada pelo crescimento das diferentes linhagens de levedura em meio contendo níveis crescentes de 3-amino-1,2,4-triazole (3-AT), um inibidor competitivo da proteína his3p, que é o produto do gene repórter his3. Os ensaios de trans-ativação realizados nas diferentes linhagens sugerem que no sistema de mono-híbrido de levedura o fator de transcrição E74A é capaz de se ligar diretamente ao módulo cis-regulador de 129 pb, indicando que a interaç30 entre este fator de transcrição e o promotor de BhC4-1 dá-se de modo direto. No conjunto os dados obtidas ampliam a caracterização dos mecanismos moleculares que controlam a expressão do gene BhC4-1 na glândula salivar e contribuem também com dados novos acerca do fator de transcrição E74A, um fator de transcrição que faz parte da família ETS.
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2014
- Data da defesa: 21.10.2014
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ABNT
FRANK, Henrique Oliveira. Análise da interação entre o fator de transcrição E74A de Drosophila melanogaster com o módulo cis-regulador (-186/-58) de BhC4-1 no sistema mono-híbrido de levedura. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. . Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Frank, H. O. (2014). Análise da interação entre o fator de transcrição E74A de Drosophila melanogaster com o módulo cis-regulador (-186/-58) de BhC4-1 no sistema mono-híbrido de levedura (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Frank HO. Análise da interação entre o fator de transcrição E74A de Drosophila melanogaster com o módulo cis-regulador (-186/-58) de BhC4-1 no sistema mono-híbrido de levedura. 2014 ;[citado 2024 abr. 19 ] -
Vancouver
Frank HO. Análise da interação entre o fator de transcrição E74A de Drosophila melanogaster com o módulo cis-regulador (-186/-58) de BhC4-1 no sistema mono-híbrido de levedura. 2014 ;[citado 2024 abr. 19 ]
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