Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real (2014)
- Authors:
- Autor USP: ROCHA JÚNIOR, MAURÍCIO CRISTIANO - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 604
- Subjects: INFECÇÕES POR HTLV-I; DIAGNÓSTICO; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
- Keywords: Confirmatório; HTLV1/2; PCR em tempo real; Confirmation; Diagnostic; Real-time PCR
- Language: Português
- Abstract: A significativa prevalência da infecção pelo HTLV-1/2 no Brasil tornou compulsória a triagem sorológica em bancos de sangue desde 1993. A realização de um diagnóstico eficaz e seguro desta infecção tem importância no correto aconselhamento dos pacientes, bem como na adoção de medidas preventivas em relação à transmissão do HTLV-1/2. Entretanto, a ineficiência dos testes confirmatórios disponíveis somado ao alto custo, são fatores limitantes para a conclusão segura do status clínico do paciente. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, padronizar e validar uma plataforma molecular (NAT) multiplex utilizando a metodologia de PCR em tempo real para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2. Para tanto, foi padronizada a PCR em tempo real utilizando o sistema de sondas de hidrólise (TaqMan®) e a região gênica viral pol foi utilizada como alvo dessas reações. As reações foram otimizadas e validadas em amostras de DNA de controles positivos e negativos, amostras de DNA obtidas a partir do sangue total de indivíduos infectados pelo HTLV-1/2, candidatos à doação de sangue e de pacientes infectados por outras viroses (HIV, HBV e HCV). Após a padronização, a plataforma molecular foi validada em relação aos seguintes parâmetros: sensibilidade analítica, sensibilidade diagnóstica, especificidade analítica, especificidade diagnóstica, precisão e robustez. O limite de detecção do teste (LoD) foi de 3,85 cópias/reação para HTLV-1 e 10,88 cópias/reação para HTLV-2. Para a especificidade, não foi observada reação cruzada com os vírus HAV, HBV, HCV, HIV-1 e HIV-2 e B19V obtidas a partir de um painel de referência viral e nem com amostras de indivíduos portadores de HIV, HBV ou HCV. A sensibilidade diagnóstica foi de 94,6% para HTLV-1 e 78,6 % para HTLV-2. O coeficiente de variação encontrado no parâmetro precisão foi de até 0,475%. A metodologia desenvolvida é umasimples, de baixo custo, sensível e altamente específica, portanto, adequada para detecção e discriminação da infecção por este retrovírus. A padronização desta plataforma tem um importante impacto no fortalecimento da capacitação tecnológica nacional. Além disso, propõe seu uso no algoritmo diagnóstico, o qual permitirá a conclusão segura do diagnóstico do HTLV-1/2
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2014
- Data da defesa: 10.10.2014
-
ABNT
ROCHA JÚNIOR, Maurício Cristiano. Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real. 2014. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/. Acesso em: 28 mar. 2024. -
APA
Rocha Júnior, M. C. (2014). Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/ -
NLM
Rocha Júnior MC. Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real [Internet]. 2014 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/ -
Vancouver
Rocha Júnior MC. Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real [Internet]. 2014 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas