Função de subsítios de uma catepsina digestiva de Tenebrio molitor (2014)
- Authors:
- Autor USP: DAMASCENO, TICIANE FRAGA - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: ENZIMOLOGIA; TENEBRIONIDAE; PROTEINASES; DIGESTÃO ANIMAL
- Language: Português
- Abstract: A catepsina L, uma cisteína proteinase da família da papaína, é a principal proteinase digestiva do besouro Tenebrio molitor. Estudos anteriores do nosso grupo mostraram que existem três catepsinas L no intestino médio do T. molitor, uma delas é lisossômica (CAL 1) e as outras duas são digestivas (CAL 2 e CAL 3). As estruturas 3D das enzimas digestivas foram recentemente elucidadas. Com o objetivo de estudar em detalhes as propriedades das enzimas digestivas, CAL 3 foi expressa como um zimógeno em E. coli, purificada por cromatografia de afinidade e autoativada em meio ácido. Foram realizados ensaios de atividade com 63 peptídeos FRET derivados da sequência Abz-KLRSSKQ-EDDnp em um espectrofluorímetro termostatizado a 30ºC, monitorando-se continuamente a variação de fluorescência em 320 nm (´ΛIND.ex´) e 420 nm (´λIND.em´). Os parâmetros ´kIND.cat´ e ´KIND.M´ obtidos foram utilizados na determinação da hidrofobicidade dos subsítios (H) e da função de cada subsítio através da razão das energias livres de ativação do complexo enzima-substrato (Δ´GPOT.‡´´IND.T´) e de ligação da enzima com o substrato (Δ´GIND.s´). Os resultados mostram que o subsítio S2 está envolvido prioritariamente em catálise e é bastante seletivo para substratos com resíduos hidrofóbicos em P2. Esse subsítio é o mais hidrofóbico dentre os analisados, encontrando-se num bolsão localizado no interior da enzima. O subsítio S2, por outro lado, é o que apresentou a menor especificidade dentre os analisados. Este subsítio está envolvido prioritariamente na ligação com o substrato e se localiza na superfície da enzima, o que pode facilitar a acomodação de diferentes cadeias laterais em P'2 do substrato, não oferecendo muitas restrições espaciais. O subsítio S1, hidrofílico, não é muito seletivo, o que pode ser consequência de sua localização na superfície da enzima.Esse subsítio está prioritariamente envolvido na ligação com o substrato. O subsítio S'1, assim como S1, está localizado na superfície da enzima, é hidrofílico e não muito seletivo. No entanto, esse subsítio tem papel na catálise além de atuar na ligação do substrato. Numa análise inicial da estrutura 3D deste subsítio, sua função catalítica foi atribuída à presença de parte da cavidade oxiânica. Uma enzima com mutação no resíduo W187, pertencente à cavidade oxiânica e a S'1, foi produzida e purificada, no entanto essa enzima não apresentou atividade. Uma análise mais aprofundada mostrou que a falta de atividade pode ser atribuída ao fato do resíduo de aminoácido mutado fazer parte de um cluster aromático essencial à estabilização da tríade catalítica. Os dados obtidos na caracterização de S'1 e S'2 permitem inferir que a acilação é o passo limitante da reação da CAL 3. Além disso, os resultados deste trabalho mostram que o conceito de hidrofobicidade de subsítios proposto anteriormente pelo grupo parece ser aplicável a subsítios que apresentem especificidades mais restritas
- Imprenta:
- Data da defesa: 27.05.2014
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ABNT
DAMASCENO, Ticiane Fraga. Função de subsítios de uma catepsina digestiva de Tenebrio molitor. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-20012015-143853/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Damasceno, T. F. (2014). Função de subsítios de uma catepsina digestiva de Tenebrio molitor (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-20012015-143853/ -
NLM
Damasceno TF. Função de subsítios de uma catepsina digestiva de Tenebrio molitor [Internet]. 2014 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-20012015-143853/ -
Vancouver
Damasceno TF. Função de subsítios de uma catepsina digestiva de Tenebrio molitor [Internet]. 2014 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-20012015-143853/
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