Clonagem e expressão de proteína antiviral presente na hemolinfa de Lonomia obliqua por tecnologia de DNA recombinante em Escherichia coli (2014)
- Autores:
- Autor USP: SILVA, DALTON GIOVANNI NOGUEIRA DA - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Assuntos: ANTIVIRAIS; PROTEINAS; DNA RECOMBINANTE; CLONAGEM; ESCHERICHIA COLI
- Palavras-chave do autor: Escherichia coli; Escherichia coli; Lonomia obliqua; Lonomia obliqua; Antiviral protein; Clonagem; Cloning; Expressão; Expression; Proteína antiviral
- Idioma: Português
- Resumo: Em 2009, foi demonstrado um potente antiviral na hemolinfa de L. obliqua. Esta proteína purificada reduziu o título viral (TCID50 ml-1) do sarampo, pólio e H1N1 em 157, 61 e 64 vezes. Recentemente, expressamos a proteína antiviral em sistema baculovírus, que reduziu o título de vírus do herpes em 106 vezes, da rubéola e EMC em 105 vezes. No entanto, este sistema de expressão é muito caro e trabalhoso. Com isso, clonamos e expressamos esta proteína com atividade antiviral em sistema bacteriano. A sequência antiviral foi clonada em vetor de expressão pET28a. As construções resultantes foram expressas em E. coli Bl21 DE3 pLysS induzidas com IPTG 1,0 mM. Após expressão, o pellet bacteriano foi sonicado e o material foi purificado por afinidade e gel filtração. Testou-se contra o vírus EMC mostrando uma proteção de 104 vezes em relação ao controle. E utilizando qPCR para determinar os níveis de transcrição de RNA do vírus do herpes e da rubéola em células infectadas mostrou uma inibição respectivamente de 106 e 105 vezes, em relação ao controle
- Imprenta:
- Data da defesa: 01.10.2014
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ABNT
SILVA, Dalton Giovanni Nogueira da. Clonagem e expressão de proteína antiviral presente na hemolinfa de Lonomia obliqua por tecnologia de DNA recombinante em Escherichia coli. 2014. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10122014-143544/. Acesso em: 20 abr. 2024. -
APA
Silva, D. G. N. da. (2014). Clonagem e expressão de proteína antiviral presente na hemolinfa de Lonomia obliqua por tecnologia de DNA recombinante em Escherichia coli (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10122014-143544/ -
NLM
Silva DGN da. Clonagem e expressão de proteína antiviral presente na hemolinfa de Lonomia obliqua por tecnologia de DNA recombinante em Escherichia coli [Internet]. 2014 ;[citado 2024 abr. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10122014-143544/ -
Vancouver
Silva DGN da. Clonagem e expressão de proteína antiviral presente na hemolinfa de Lonomia obliqua por tecnologia de DNA recombinante em Escherichia coli [Internet]. 2014 ;[citado 2024 abr. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10122014-143544/
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