Desenvolvimento de Reações em Cadeia pela Polimerase (PCRs) para o diagnóstico diferencial das principais espécies de Brucella (2011)
- Autores:
- Autor USP: SALGADO, VANESSA RIESZ - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- Assuntos: BACTÉRIAS AERÓBICAS GRAM-NEGATIVAS; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
- Palavras-chave do autor: Brucella; Brucella; diagnóstico diferencial; differential diagnosis; espécies; padronização; PCR; PCRs; species; standardization
- Idioma: Português
- Resumo: A brucelose é uma doença altamente contagiosa, responsável por grandes prejuízos econômicos e de saúde pública. É causada por bactérias do gênero Brucella, cujas espécies e seus biovares costumam ser caracterizados pelo isolamento e identificação de características fenotípicas da colônia. Dificuldades como, o perigo na manipulação dos microrganismos, processos laboriosos de tipificação, demora na obtenção de resultados e a instabilidade de características fenotípicas ou isolamento de linhagens atípicas dificultam a tipificação e encorajaram a busca de técnicas mais sensíveis e específicas, como a PCR, que resolveria as dificuldades e facilitaria a investigação epidemiológica dos casos humanos e animais. Diversas análises e o sequenciamento de determinados genes e do genoma completo de algumas espécies, demonstraram a existência de polimorfismos únicos no DNA das brucelas, que podem ser utilizados na sua identificação. Baseado nas dificuldades de identificação e na descoberta de polimorfismos únicos no DNA bacteriano das espécies, nosso objetivo foi desenvolver primers específicos para identificação de seis espécies do gênero B. abortus, B. melitensis, B. suis, B. canis, B. ovis e B. neotomae, e padronizar PCRs que permitissem identificá-las com maior sensibilidade e rapidez. Tentamos caracterizar marcadores moleculares para o desenho de primers espécie-específicos, através da amplificação randômica e clonagem dos fragmentos específicos, sem resultados satisfatórios. Apenasum primer para B. abortus foi conseguido quando foram analisados os polimorfismos já descritos na literatura. Assim, realizou-se o alinhamento múltiplo das sequências dos cromossomos I e II das espécies de Brucella, que permitiu a identificação de vários eventos polimórficos específicos para cada espécie, dos quais foram escolhidas regiões potenciais para o desenho de sete primers (dois para B. canis, B. melitensis e B. ovis, e outro para B. canis/B. suis) que tiveram sua especificidade analítica verificada com o programa Primer BLAST e testada nas 18 cepas de referência de Brucella, compreendendo a B. abortus, B. melitensis, B. suis e seus biovares, além da e B. neotomae, e em 231 isolados de campo, incluindo B. abortus, B. canis e B. suis. Os testes de especificidade dos primers resultaram na amplificação do fragmento esperado de quase todas as cepas de referência e de campo, exceto para o primer de B. canis e o de B. canis/B. suis. Estes resultados sugerem que os marcadores desenhados são promissores na diferenciação das espécies
- Imprenta:
- Data da defesa: 21.01.2011
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ABNT
SALGADO, Vanessa Riesz. Desenvolvimento de Reações em Cadeia pela Polimerase (PCRs) para o diagnóstico diferencial das principais espécies de Brucella. 2011. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2011. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-11102012-115215/. Acesso em: 18 set. 2024. -
APA
Salgado, V. R. (2011). Desenvolvimento de Reações em Cadeia pela Polimerase (PCRs) para o diagnóstico diferencial das principais espécies de Brucella (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-11102012-115215/ -
NLM
Salgado VR. Desenvolvimento de Reações em Cadeia pela Polimerase (PCRs) para o diagnóstico diferencial das principais espécies de Brucella [Internet]. 2011 ;[citado 2024 set. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-11102012-115215/ -
Vancouver
Salgado VR. Desenvolvimento de Reações em Cadeia pela Polimerase (PCRs) para o diagnóstico diferencial das principais espécies de Brucella [Internet]. 2011 ;[citado 2024 set. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-11102012-115215/
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