Estudos estruturais e termodinâmicos das centrinas BeCen1 e Becen3 do fungo Blastocladiella emersonii (2011)
- Authors:
- Autor USP: CAMARGO, ANA ISABEL DE - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: PROTEÍNAS (ESTUDO); CRISTALOGRAFIA; CÁLCIO
- Language: Português
- Abstract: Centrinas são proteínas componentes essenciais nos centro organizadores de microtubulos em diversos organismos. Pertencem à família das proteínas "EF-Hand" ligantes de cálcio e podem ser divididas em duas subfamílias: uma definida pela centrina da alga Chlamydomonas reinhardtii CrCenp, associada a funções contráteis, e a outra pela centrina da levedura Saccharomices cerevisiae ScCdc31 p, relacionada a duplicação de centros mitóticos. Curiosamente o fungo Blastocladiella emersonii possui duas formas de centrinas em seu genoma : BeCen 1 mais parecida com a CrCenp, e BeCen3 com a ScCdc31 p, enquanto todos os outros fungos já descritos possuem apenas uma forma, pertencente ao grupo ScCdc31 p. Diante desse fato curioso, descrito em 2005, estudos estruturais e termodinâmicos comparativos entre as proteínas recombinantes BeCen1 e BeCen3, foram desenvolvidos para identificar e caracterizar diferenças relevantes, que pudessem justificar a presença dessas duas proteínas no fungo Blatocladiella emersonii. Ambas as centrinas foram expressas em E. coli e purificadas por cromatografia, resultando em um rendimento de aproximadamente 5mg/1. Analises estruturais foram realizadas utilizando técnicas de dicroísmo circular (CD) , fluorescência, espalhamento de luz (DLS e RALS), microscopias de força atômica (AFM) e eletrônica de transmissão (MET). Por calorimetria de titulação isotérmica (lTC) parâmetros termodinâmicos foram obtidos para BeCen1 e BeCen3 em relação a ligação de cálcio. Ambas apresentaram conteúdo predominante de hélices alfa e diferenças físico-químicas e estruturais marcantes. BeCen 1, após desnaturação a 90°C e deixada a temperatura de 4°C por 24 horas horas, mostrou um espectro de CD compatível com um processo de reenovelamento; a TM foi de 42°C e aumentou cerca de 4°C na forma holo; os espectros de CD são modificados na presença de cálcio,mostrando uma forma característica de movimentação de hélices das proteínas ligantes de cálcio; pelos dados obtidos por ITC liga cálcio em três sítios "EF-Hand" por uma reação endotérmica; na presença de magnésio apresentou mudanças conformacionais, compatíveis com a ligação deste nos sítios de cálcio; a partir de 40°C é observado um processo de agregação chegando a formação de filamentos, que foram visualizados por AFM e MET. BeCen3 após ser desnaturada e colocada nas mesmas condições de BeCen 1, permanece desnaturada; A TM é de 49°C e aumentou em aproximadamente 5°C na forma holo; os espectros de CD, na presença de cálcio, apresentam aspectos característicos de movimentação de a-hélices das proteínas ligantes de cálcio; liga cálcio em apenas dois sítios "EF-Hand" por uma reação exotérmica, sofre mudanças conformacionais na presença de magnésio e a partir de 30°C já sofre um processo de agregação, formando filamentos. Neste trabalho foi estabelecido o primeiro protocolo para a expressão e purificação das centrinas de B. emersonii, além dos estudos de caracterização estrutural termodinâmica destas proteínas. O estudo também foi pioneiro quanto a obtençãode imagens no processo de formação de filamentos destas centrinas na ausência de cálcio. Ascentrinas de B. emersonii apresentam diferenças importantes nas respostas em função da presença de cálcio e também do magnésio. Os dados obtidos são fortes indicativos que estas centrinas têm mecanismos de ação diferentes dentro do fungo B. emersonii.
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2011
- Data da defesa: 27.05.2011
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ABNT
CAMARGO, Ana Isabel de. Estudos estruturais e termodinâmicos das centrinas BeCen1 e Becen3 do fungo Blastocladiella emersonii. 2011. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2011. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-30082011-082206/. Acesso em: 19 set. 2024. -
APA
Camargo, A. I. de. (2011). Estudos estruturais e termodinâmicos das centrinas BeCen1 e Becen3 do fungo Blastocladiella emersonii (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-30082011-082206/ -
NLM
Camargo AI de. Estudos estruturais e termodinâmicos das centrinas BeCen1 e Becen3 do fungo Blastocladiella emersonii [Internet]. 2011 ;[citado 2024 set. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-30082011-082206/ -
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Camargo AI de. Estudos estruturais e termodinâmicos das centrinas BeCen1 e Becen3 do fungo Blastocladiella emersonii [Internet]. 2011 ;[citado 2024 set. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-30082011-082206/
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