Purificação, conjugação e avaliação "in vitro" da atividade antineoplásica da L-asparaginase produzida por Aspergillus terreus (cepa PC-1.7.A) (2010)
- Authors:
- Autor USP: LOUREIRO, CLÁUDIO BATTISTON - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: ASPERGILLUS; ENZIMAS (ISOLAMENTO E PURIFICAÇÃO)
- Language: Português
- Abstract: A enzima L-asparaginase (L-asparagina amino hidrolase, E.C. 3.5.1.1) é uma das drogas mais utilizadas no tratamento da leucemia linfoblástica aguda. A enzima catalisa a hidrólise do aminoácido asparagina em ácido aspártico e amônia. Algumas linhagens de células tumorais não são capazes de produzir asparagina, dependendo do aminoácido presente no plasma para a síntese proteica. A redução dos níveis plasmáticos de asparagina inibe a síntese de proteínas e depois a síntese de RNA e DNA das células leucêmicas levando-as a morte por apoptose. A cepa de Aspergillus terreus (PC-1.7.A) utilizada nesse trabalho foi isolada de solo e produziu altas concentrações de L-asparaginase. O objetivo do presente trabalho foi purificar, caracterizar, conjugar a enzima e avaliar sua atividade citotóxica em linhagens de células tumorais in vitro. Para a purificação da enzima foram utilizados métodos cromatográficos de interação por troca iônica (DEAE Sepharose) e por gel filtração em diferentes fluxos (Sephacryl S-200HR). A enzima pura foi conjugada com metóxi polietilenoglicol e manteve 93% da atividade inicial. A enzima presente no fluido da cultura dialisado e concentrado manteve sua atividade por até 90 dias a 5ºC. Composta por uma subunidade com massa molecular de 125 kDa a L-asparaginase purificada de A. terreus apresentou atividade catalítica ótima em pH 9,5 e 40ºC e foi estável nessa temperatura por pelo menos 120 minutos. A enzima pura e pura-conjugada apresentou valores de Km de 2,42 e 2,51 mmol/L e Vmax de 11,91 e 12,08 umol.min-1.mg-1, respectivamente. A enzima pura-conjugada perdeu metade de sua atividade em trinta minutos quando incubada com enzimas proteolíticas, enquanto que a enzima pura perdeu metade de sua atividade em cinco minutos sob as mesmas condições. A L-asparaginase pura na concentração de 200 ug/mL reduziu em 50% as células viáveis das linhagens tumorais HL-60e RS4;11 nos tempos de incubação de 72 e 96 horas, respectivamente, sob as mesmas condições a enzima pura não apresentou atividade citotóxica contra a linhagem controle (PBMC)
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2010
- Data da defesa: 23.11.2010
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ABNT
LOUREIRO, Cláudio Battiston. Purificação, conjugação e avaliação "in vitro" da atividade antineoplásica da L-asparaginase produzida por Aspergillus terreus (cepa PC-1.7.A). 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-01122010-193435/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Loureiro, C. B. (2010). Purificação, conjugação e avaliação "in vitro" da atividade antineoplásica da L-asparaginase produzida por Aspergillus terreus (cepa PC-1.7.A) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-01122010-193435/ -
NLM
Loureiro CB. Purificação, conjugação e avaliação "in vitro" da atividade antineoplásica da L-asparaginase produzida por Aspergillus terreus (cepa PC-1.7.A) [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-01122010-193435/ -
Vancouver
Loureiro CB. Purificação, conjugação e avaliação "in vitro" da atividade antineoplásica da L-asparaginase produzida por Aspergillus terreus (cepa PC-1.7.A) [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-01122010-193435/
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