Na,K-ATPase reconstituída em lipossomos de fosfolipidios e colesterol: caracterização biofísica e bioquímica (2010)
- Authors:
- Autor USP: YONEDA, JULIANA SAKAMOTO - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: LIPOSSOMOS; CALORÍMETROS; MEMBRANA PLASMÁTICA; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: A Na,K-ATPase é uma proteína integral que utiliza a energia derivada da hidrólise do ATP para transportar tons Na+ e K+ através da membrana contra seus gradientes eletroquímicos. É composta por três subunidades, denominadas ‘alfa’, ‘beta’ e ‘gama’. Alguns autores defendem que o protômero (‘alfa’‘beta’) seja a unidade estrutural e funcional da enzima, porém outros consideram que a enzima nativa da membrana funciona como um oligômero, na forma de um dímero ‘(‘alfa’‘beta’) IND 2’. Em estudos com proteínas de membrana, o uso de detergentes é bastante comum para manter a proteína de interesse em um estado funcional após ser retirada da bicamada lipídica, além disso, sabe-se que vários fatores interferem a atividade enzimática da Na,K-ATPase e existem evidências que mostram que a bicamada lipídica, na qual a enzima está inserida, também controla a interação entre os protômeros da proteína e alterações nas suas propriedades biofísicas podem modular a atividade da enzima. O objetivo do trabalho foi verificar o efeito de diferentes razões detergente/proteína na estabilidade da Na,K-ATPase solubilizada e de diferentes microambientes lipídicos na sua atividade, analisando as alterações no comportamento termotrópico da bicamada com a mudança da composição lipídica, observando as alterações da incorporação e recuperação da atividade enzimática quando a proteína foi reconstituída em sistemas miméticos de membrana. Utilizando o espalhamento dinâmico de luz (DLS) foi possível acompanhar o processo de agregação térmica da enzima, fornecendo informações da sua estrutura, bem como avaliar a sua estabilidade quando solubilizada. A desnaturação térmica da Na,K-ATPase também foi avaliada por calorimetria diferencial de varredura (DSC) e verificou-se que é um processo irreversível, e ocorreu entre 50 e 70°C, sendo a soma de três transiçõesUtilizando DSC, analisou-se ainda o comportamento termotrópico dos sistemas de lipossomos e proteolipossomos constituídos de DPPC, DPPE e colesterol. Para os sistemas vesiculares, na ausência da proteína, foi observado que para o sistema binário de DPPC e DPPE, o aumento da proporção do último lipídio induz uma separação de fase, assim como a presença de colesterol, tanto nos sistemas binários (DPPC:Col e DPPE:Col), quanto no ternário (DPPC:DPPE:Col). Avaliou-se ainda como o microambiente lipídico interfere na incorporação e atividade da Na,K-ATPase. Verificou que diferentes quantidades de colesterol alteram a atividade enzimática, confirmando que este possui um importante papel na modulação da atividade, alterando propriedades da membrana e influenciando na conformação da proteína
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2010
- Data da defesa: 03.03.2010
-
ABNT
YONEDA, Juliana Sakamoto. Na,K-ATPase reconstituída em lipossomos de fosfolipidios e colesterol: caracterização biofísica e bioquímica. 2010. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08062010-093348/. Acesso em: 07 maio 2024. -
APA
Yoneda, J. S. (2010). Na,K-ATPase reconstituída em lipossomos de fosfolipidios e colesterol: caracterização biofísica e bioquímica (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08062010-093348/ -
NLM
Yoneda JS. Na,K-ATPase reconstituída em lipossomos de fosfolipidios e colesterol: caracterização biofísica e bioquímica [Internet]. 2010 ;[citado 2024 maio 07 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08062010-093348/ -
Vancouver
Yoneda JS. Na,K-ATPase reconstituída em lipossomos de fosfolipidios e colesterol: caracterização biofísica e bioquímica [Internet]. 2010 ;[citado 2024 maio 07 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-08062010-093348/ - Estudos biofísicos da interação entre a Na,K-ATPase e a subunidade gama, ATP, Na+ , K+ , DPPC, DPPE e colesterol
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