Melhoramento genético de linhagens industriais de levedura para obtenção de clones com aumento de tolerância a altas concentrações de glicose e etanol (2009)
- Autores:
- Autor USP: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Idioma: Português
- Resumo: Atualmente, o Brasil é um dos maiores produtores e exportadores de álcool combustível (etanol) do mundo. A produção industrial de etanol a partir da biomassa de cana-de-açúcar se destaca como uma excelente estratégia, tanto do ponto de vista econômico quanto energético e ambiental. Recentemente, um estudo da maquinaria de transcrição global da linhagem de levedura Saccharomyces cerevisiae S288C (linhagem de laboratório) revelou que quando inseridas multiplas cópias adicionais do alelo triplo mutante codificador do fator de transcrição global SPT15, passa a utilizar mais rapidamente a glicose, e aumenta o seu rendimento de produção de etanol em 15%. Neste trabalho propõe-se a construção de linhagens de leveduras S. cerevisiae com aumento na tolerância a altas concentrações de glicose e rendimento de produção de etanol. Para que este objetivo fosse atingido, numa primeira etapa, foi realizada uma mutagênese sítio dirigida do gene SPT15 para introduzir três mutações (spt15-300), utilizando a técnica de SOEing PCR. Para tanto o DNA genômico da linhagem S. cerevisiae S288C foi extraído e utilizado como molde para amplificação por SOEing PCR, para obtenção do alelo spt15-300. O produto de PCR (spt15-300) foi empregado na mistura de ligação com o vetor pGEM-T (Promega) e após 16 horas de incubação a 4°C, a mistura de ligação foi empregada na transformação genética da linhagem E. coli DH5?, pelo método de eletroporação. A seleção dos transformantes foirealizada em meio LB ágar contendo ampicilina (100 mg/ml) e suplementado com X-GAL e IPTG. Os clones recombinantes foram diferenciados por sua coloração branca. O DNA plasmidial foi isolado ("mini-prep"), purificado e digerido com a enzima de restrição BamHI, para liberar o inserto spt15-300. ) A confirmação da clonagem foi realizada através da reação de PCR empregando como molde o DNA isolado dos plasmídios recombinantes obtidos, empregando-se os "primers" utilizados no início da amplificação de spt15-300. Conforme esperado, este procedimento resultou na amplificação de um produto de DNA com, aproximadamente, 750pb correspondente ao spt15-300. Este alelo mutado será utilizado numa próxima etapa para clonagem no vetor pGEMT- Easy?, desenvolvido previamente em nosso laboratório.
- Imprenta:
- Editora: Sociedade Brasileira de Microbiologia
- Local: Porto de Galinhas
- Data de publicação: 2009
- Fonte:
- Título do periódico: Resumos
- Nome do evento: Congresso Brasileiro de Microbiologia
-
ABNT
DALMOLIN, K. P. P. et al. Melhoramento genético de linhagens industriais de levedura para obtenção de clones com aumento de tolerância a altas concentrações de glicose e etanol. 2009, Anais.. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2009. . Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Dalmolin, K. P. P., Carvalho, F. S., Monteiro, A. R. S., & Vicente, E. J. (2009). Melhoramento genético de linhagens industriais de levedura para obtenção de clones com aumento de tolerância a altas concentrações de glicose e etanol. In Resumos. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia. -
NLM
Dalmolin KPP, Carvalho FS, Monteiro ARS, Vicente EJ. Melhoramento genético de linhagens industriais de levedura para obtenção de clones com aumento de tolerância a altas concentrações de glicose e etanol. Resumos. 2009 ;[citado 2024 abr. 19 ] -
Vancouver
Dalmolin KPP, Carvalho FS, Monteiro ARS, Vicente EJ. Melhoramento genético de linhagens industriais de levedura para obtenção de clones com aumento de tolerância a altas concentrações de glicose e etanol. Resumos. 2009 ;[citado 2024 abr. 19 ] - Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional PGTY-glico
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