Clonagem do sistema de partição parB em plasmídeo de amplo espectro de hospedeiras (2009)
- Autores:
- Autores USP: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB ; SCHENBERG, ANA CLARA GUERRINI - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Idioma: Português
- Resumo: O fragmento gênico parB, originário do plasmídeo R1 de E. coli, codifica 3 genes: (i) hok (host killing), que codifica uma toxina letal, cujo RNAm é estável; (ii) mok (modulation of killing), que apresenta fase de leitura sobreposta à da sequência hok, sendo necessário para a expressão e tradução de hok, e (iii) sok (suppression of killing), que codifica um pequeno RNA anti-senso (instável) ao RNAm hok, o que bloqueia a tradução da proteína letal Hok. Quando o plasmídeo portador de parB é perdido pela célula ou ocorre falha durante a segregação, ocorre rápida degradação do RNA anti-senso sok, ocasionando a tradução do RNAm mok-hok e, portanto, a produção da toxina Hok, provocando a morte celular. Com o objetivo de aumentar a estabilidade segregacional do plasmídeo de amplo espectro de hospedeiras pCM2, construído em trabalhos anteriores do nosso grupo e que necessita de pressão seletiva para manter-se na bactéria hospedeira, foi clonado o fragmento parB, em substituição ao fragmento MOB, codificador de mobilização plasmidial em pCM2. Para tanto, a sequência codificadora de parB foi amplificada por PCR utilizando iniciadores específicos com sitos de restrição enzimática NarI e AatII (desenhados neste trabalho) e como molde o vetor pOU61. O amplicon foi clonado no vetor comercial pCR2.1TOPO e sequenciado, originando o plasmídeo pPAR. Posteriormente, o fragmento parB foi isolado do vetor pPAR. O plasmídeo pCM2 foi digerido enzimaticamente com as enzimas NarI eAatII, o que ocasiona a liberação do fragmento MOB, e neste sítio foi sub-clonado o fragmento parB, gerando o vetor final pCM3 com dupla vantagem: (i) portador da sequência parB, codificadora de estabilidade segregacional e (ii) sem o fragmento MOB, o que evita a passagem do plasmídeo pCM3 para outras bactérias por meio de conjugação
- Imprenta:
- Editora: Sociedade Brasileira de Microbiologia
- Local: Porto de Galinhas
- Data de publicação: 2009
- Fonte:
- Título do periódico: Resumos
- Nome do evento: Congresso Brasileiro de Microbiologia
-
ABNT
BIONDO, R. et al. Clonagem do sistema de partição parB em plasmídeo de amplo espectro de hospedeiras. 2009, Anais.. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2009. . Acesso em: 25 set. 2024. -
APA
Biondo, R., Racowiski, I., Marquezoni, D. P., Schenberg, A. C. G., & Vicente, E. J. (2009). Clonagem do sistema de partição parB em plasmídeo de amplo espectro de hospedeiras. In Resumos. Porto de Galinhas: Sociedade Brasileira de Microbiologia. -
NLM
Biondo R, Racowiski I, Marquezoni DP, Schenberg ACG, Vicente EJ. Clonagem do sistema de partição parB em plasmídeo de amplo espectro de hospedeiras. Resumos. 2009 ;[citado 2024 set. 25 ] -
Vancouver
Biondo R, Racowiski I, Marquezoni DP, Schenberg ACG, Vicente EJ. Clonagem do sistema de partição parB em plasmídeo de amplo espectro de hospedeiras. Resumos. 2009 ;[citado 2024 set. 25 ] - Isolation of Trypanosoma cruzi dna fragments which function as ars elements in Saccharomyces cerevisiae
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