Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene LmjF24.0320 que codifica a enzima fumarato hidratase em Leishmania major (2009)
- Authors:
- Autor USP: FELICIANO, PATRICIA ROSA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: LEISHMANIA; ENZIMAS; CLONAGEM
- Language: Português
- Abstract: Leishmania é um protozoário parasito flagelado responsável pela Leishmaniose, doença que afeta 88 países, distribuídos em 4 continentes, e que causa um risco a aproximadamente 350 milhões de pessoas. Estudos recentes em tripanosomatídeos, utilizando Trypanosoma brucei como modelo, sugerem que as enzimas fumarato hidratase, enzimas que catalisam a hidratação reversível da molécula de fumarato em S-malato, são essenciais para sobrevivência de tripanossomatídeos. O presente projeto visou a clonagem, expressão, purificação e caracterização cinética e biofísica da enzima fumarato hidratase codificada pelo gene LmjF24.0320 de Leishmania major. A proteína foi expressa em bactéria e purificada por cromatografia de afinidade. Os ensaios de cinética enzimática mostram que a enzima segue o modelo de cinética de Michaelis-Menten com 'K IND.m' e 'V IND.max' de 2,7 '+ ou -' 0,5 mM e 35,2 '+ ou -' 5,8 'mu'mol/min/mg para fumarato e 5,2 '+ ou -' 0,4 mM e 11,8 '+ ou -'0,6 'mu'mol/min/mg para S-malato, respectivamente. Para os estudos de localização celular foram produzidos e purificados anticorpos policlonais para as isoformas LmFH-1 e LmFH-2 de Leishmania major através de imunização de coelhos. A combinação de técnicas de imunofluorescência por microscopia confocal, western blotting e controle da atividade enzimática através fracionamento celular com digitonina nos permitiu concluir que a isoforma LmFH-1 se encontra localizada na mitocôndria do parasito, enquanto quea isoforma LmFH-2 possue dupla localização, sendo encontrada tanto no citosol quanto no glicossomo. A presença das isoformas LmFH-1 e LmFH-2 nos três compartimentos celulares: citosol, glicossomo e mitocôndria reforçam a importância da molécula de fumarato em diferentes processos celulares, e fortalecem a idéia de que a enzima fumarato hidratase pode ser considerada um potencial alvo para planejamento de fármacos anti-leishmaniose.
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2009
- Data da defesa: 11.08.2009
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ABNT
FELICIANO, Patrícia Rosa. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene LmjF24.0320 que codifica a enzima fumarato hidratase em Leishmania major. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-24102009-140328/. Acesso em: 20 set. 2024. -
APA
Feliciano, P. R. (2009). Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene LmjF24.0320 que codifica a enzima fumarato hidratase em Leishmania major (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-24102009-140328/ -
NLM
Feliciano PR. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene LmjF24.0320 que codifica a enzima fumarato hidratase em Leishmania major [Internet]. 2009 ;[citado 2024 set. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-24102009-140328/ -
Vancouver
Feliciano PR. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização do gene LmjF24.0320 que codifica a enzima fumarato hidratase em Leishmania major [Internet]. 2009 ;[citado 2024 set. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-24102009-140328/
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