Produção, purificação e caracterização do complexo pectinolítico do fungo aspergillis niveus (2008)
- Autores:
- Autor USP: MALLER, ALEXANDRE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Assuntos: ASPERGILLUS (PROCESSOS QUÍMICOS); BIOQUÍMICA
- Idioma: Português
- Resumo: Pectina é o maior componente da parede celular de plantas. Esses polissacarídeos podem ser degradados por enzlmas pécticas, nomeadas, pectinases. Podem ser classificadas, baseado em seu mecanismo de degradação, em enzimas desesterificantes e despolimerizantes. Pectinases são importantes enzimas industriais, utilizadas principalmente para aumentar a eficiência de filtração e clarificação de sucos de frutos, na maceração, liquefação e extração de tecidos vegetais, mas podem ser responsáveis pela patogênese em plantas. São amplamente produzidas por vários fungos filamentosos, como Aspergi/Jus sp. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção do sistema pectinolítico do Aspergillus niveus, purificação e caracterização bioquímica das poligalacturonases. Depois do "screening" entre alguns fungos filamentosos, o A. niveus foi o microrganismo selecionado devido aos altos níveis de enzimáticos produzidos, especialmente poligalacturonases, e a pouca informação sobre esta enzima deste fungo na literatura. Poligalacturonases são secretadas principalmente a partir do 2º e 3º dia de cultivo sob agitação, mas em maior quantidade no 9º dia em regime estacionário. As condições padrões de cultura submersa foram com meio Czapeck, inoculado com 5x10 POT. 4 esporos/mL, pH inicial 6,0, sob agitação, por 48 horas. As melhores fontes de carbono foram diferentes tipos de pectinas (especialmente 2,0% de pectina 8003 CPKelco), acompanhada por casca de laranja e maracujá.Em relação à fermentação em substrato sólido, a melhor produção ocorreu com pectina caramelizada Vetec POT. ® e casca de limão. Poligalacturonases brutas apresentaram excelente estabilidade a 60°C, por 90 minutos, e em pH ácido. Esta atividade foi 96% inibida por 10mM de Hg POT. ++ e 77% por Cu POT. ++. Em contrapartida, 1mM Mn POT. ++ e EDTA aumentaram a atividade 17% e 10%, respectivamente. A temperatura ótima da pectina liase bruta foi 5,5°C. Duas poligalacturonases (PGPI e PGPII) foram caracterizadas utilizando processos cromatográficos. PGPI foi purificada, utilizando coluna de DEAE-celulose, seguida de Biogel P100, com fator de purificação de 17 vezes. A purificação foi confirmada por SDS-PAGE, onde foi observado homogeneidade eletroforética PGPII apresentou duas bandas em SDDS-PAGE e não foi caracterizada. A massa molecular da PGPI foi 123 kDa por SDS-PAGE, mas 102kDa por coluna Bio-Sil-Sec-400, com 0,7x30cm, em FPLC BioRad model 2800-Solvent Delivery System. A enzima possui 37,7% de conteúdo de carboidrato e ponto isoelétrico de 5,4. O produto final formado pela ação da PGPI em polipectato de sódio foi somente ácido monogalacturônico, sendo desta maneira classificada como exopoligalacturonase. Sua temperatura ótima e pH foram em torne de 50°C e numafaixa de 4,0 -6,5, respectivamente. Apresentou alta estabilidade térmica acima de 50°C e foi extremamente estável numa faixa de pH 4,0 -8,0, por 24 horas. A enzima foiativada por Mn POT. ++, F POT. - e K POT. + e inibida por -PB POT. ++ e Ba POT. ++. O K IND. M foi 6,7mg/mL e V IND. Max de 230U/mg. Ainda, a PGPI possui homologia com exopoligalacturomases de Aspergi//us fumigatus e Neosartorya fischeri. A atividade não foi afetada por tolueno, n-hexano, benzeno e éter etílico, mas foi inibida por formaldeído e isopropanol. Estes resultados mostram o potencial desta enzima para aplicação industrial quando se utiliza diferentes pHs ou solventes orgânicos em processos de produção, como na indústria de sucos e bebidas ou na extração de produtos naturais de plantas
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2008
- Data da defesa: 28.02.2008
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ABNT
MALLER, Alexandre. Produção, purificação e caracterização do complexo pectinolítico do fungo aspergillis niveus. 2008. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. . Acesso em: 19 set. 2024. -
APA
Maller, A. (2008). Produção, purificação e caracterização do complexo pectinolítico do fungo aspergillis niveus (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Maller A. Produção, purificação e caracterização do complexo pectinolítico do fungo aspergillis niveus. 2008 ;[citado 2024 set. 19 ] -
Vancouver
Maller A. Produção, purificação e caracterização do complexo pectinolítico do fungo aspergillis niveus. 2008 ;[citado 2024 set. 19 ]
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