Expressão da trealase intestinal de Spodoptera frugiperda e efeito de 'beta'-glicosídeos naturais em trealases de insetos (2006)
- Autores:
- Autor USP: SILVA, MARIA CICERA PEREIRA DA - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Assuntos: DIGESTÃO ANIMAL (ESTUDO); INSETOS (METABOLISMO;ESTUDO); EXPRESSÃO GÊNICA; GLICOSÍDEOS (METABOLISMO;ESTUDO)
- Idioma: Português
- Resumo: A trealase solúvel foi purificada a partir do intestino de S.frugiperda. Os pKas dos grupos catalíticos determinados por inativação química são similares aos pKas determinados por analise cinética, indicando que a enzima tem um grupo carboxila que atua como um nucleófilo e um grupo guanidina que atua como doador de prótons. Dietil pirocarbonato não afeta a enzima, exceto na presença de M'alfa'Glu (inibidor competitivo). A modificação com DPC diminui a atividade enzimática da trealase e muda o valor do pKa do resíduo de Arg, indicando que o resíduo de His modula o pKa do doador de prótons. Trealase tem dois subsítios para a ligação de glicose e baseado na proteção por M'alfa'Glu durante a modificação química é possível inferir que o subsítio que liga M'alfa'Glu contém o grupo carboxila, e o outro subsítio possui o resíduo de Arg que atua como grupo catalítico e o resíduo de His. Usando diferentes estratégias nós obtivemos uma seqüência parcial do cDNA que aparentemente codifica para trealase (denominada trealase 1) e clonamos e expressamos a enzima denominada trealase 2. A trealase 2 foi expressa em B121 DE3 e purificada, sendo que suas propriedades são similares a enzÍma solúvel. O cDNA da trealase 1 provavelmente codifica para a trealase de membrana encontrada no intestino de S. frugiperda. A trealase 2 tem 587 aminoácidos, um pepitideo sinal com 23 aminoácidos e seis possíveis sítios para glicosilação. A enzima apresenta alta identidade e similaridade (61 'POR CENTO'e 76 'POR CENTO', respectivamente) com a trealase digestiva de B. mori.Foi determinada a atividade de trealase presente na carcaça, Túbulos de Malpighi, corpo gorduroso, intestino e hemolinfa de Tenebrio molitor, Musca domestica, Spodoptera frugiperda e diatraea ) saccharalis na presença e na ausência de 'beta'-glicosideos tóxicos produzidos por plantas. Os glicosídeos usados foram amigdalina, prunasina, florizina e o aglicone mandelonitrila. E a atividade das trealases de T. molitor e S. frugiperda foi determinada também na presença de esculina. Prunasina é o melhor inibidor das trealases de T. mo/itor, já para as trealases (ligadas a membrana) de D. saccharalis o melhor inibidor é florizina e esculina é o melhor inibidor das trealases de S. frugiperda Nós alimentamos S. frugiperda com uma dieta contendo 0,1 'POR CENTO' de esculina e sua presença nós tecidos foi detectada por fluorescência. Esculina foi encontrada no corpo gorduroso, Túbulos de Malpighi e hemolinfa e não foi encontrada na carcaça. A maior quantidade de esculina foi registrada na hemolinfa (0,2 mM) e as larvas alimentadas com uma dieta contendo esculina são 40 POR CENTO' menor que as larvas alimentadas numa dieta controle. A inibição das trealases pode ser um dos fatores que leva a diminuição de peso das larvas experimentais. As larvas de S. frugiperda criadas numa dieta com 0,1'POR CENTO' de amigdalina apresenta em alguns tecidos um aumento na atividade especifica de trealase oque não é observado quando as larvas são alimentadas com uma dieta com 0,1 'POR CENTO' de esculina. O aumento na atividade especifica de trealase pode ser uma das razões pela qual o desenvolvimento de S. frugiperda não é afetado pela amigdalina presente na dieta
- Imprenta:
- Data da defesa: 09.05.2006
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ABNT
SILVA, Maria Cicera Pereira da. Expressão da trealase intestinal de Spodoptera frugiperda e efeito de 'beta'-glicosídeos naturais em trealases de insetos. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2006. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28092006-145250/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Silva, M. C. P. da. (2006). Expressão da trealase intestinal de Spodoptera frugiperda e efeito de 'beta'-glicosídeos naturais em trealases de insetos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28092006-145250/ -
NLM
Silva MCP da. Expressão da trealase intestinal de Spodoptera frugiperda e efeito de 'beta'-glicosídeos naturais em trealases de insetos [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28092006-145250/ -
Vancouver
Silva MCP da. Expressão da trealase intestinal de Spodoptera frugiperda e efeito de 'beta'-glicosídeos naturais em trealases de insetos [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-28092006-145250/
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