Avaliação de proteases extracelulares da linhagem Chryseobacterium sp. kr6 e purificação e caracterização de uma metaloprotease queratinolítica (2006)
- Authors:
- Autor USP: RIFFEL, ALESSANDRO - ESALQ
- Unidade: ESALQ
- Sigla do Departamento: LGN
- Subjects: BACTÉRIAS AERÓBICAS GRAM-NEGATIVAS; ENZIMAS PROTEOLÍTICAS; METALOPROTEINASES; PROTEINASES
- Language: Português
- Abstract: A linhagem queratinolítica Chryseobacterium sp. Kr6 mostrou-se com possibilidade de aplicação em processos envolvendo queratinólise, principalmente na hidrólise de penas de frango e depilação de couro bovino. No presente trabalho avaliou-se o efeito da composição do meio sobre o crescimento e atividade proteolítica deste isolado e uma protease queratinolítica (queratinase) foi purificada e caracterizada. O microrganismo mostrou-se adaptado à utilização de queratina como substrato durante o crescimento, produziu diferentes proteases dependendo do meio utilizado e a maior atividade proteolítica foi atingida quando utilizado meio de cultivo com penas como única fonte de carbono e nitrogênio. A adição de fonte extra de nutrientes resultou em uma parcial repressão catabólica. Uma protease extracelular (Ql) foi purificada cerca de 14 vezes utilizando cromatografia de interação hidrofóbica em Phenyl-Sepharose CL 4B e gel filtração em Superose H12R. Ql mostrou ser uma proteína monomérica com peso molecular de 64 KDa determinado por SDS-P AGE e pH e temperatura ótimos de 8,5 e 50°C respectivamente. O perfil de inibição indica tratar-se uma metaloprotease e as seqüências internas dos peptídeos resultantes de digestão tríptica mostraram homologia ao sítio ativo e de ligação ao Zn da família M14 (Carboxipeptidase).). A atividade proteolítica foi estimulada pela presença de íons Ca2+ e Mg2+ e inibida por CU2+, Zn2+, AI2+, Hg 2+ e agentesredutores. Ql apresentou atividade queratinolítica sobre o substrato keratin azure, mas não foi capaz de hidrolisar penas de frango sugerindo a necessidade de outras enzimas durante o processo de degradação de penas. Utilizando os iniciadores degenerados desenhados com base na seqüência dos peptídeos, foi amplificado um fragmento de 470 pb correspondente a uma região do possível gene desta metaloproteína utilizando DNA e cDNA como molde. A seqüência do fragmento pode estar sendo expressa, mas não apresentou similaridade e homologia a proteínas conhecidas e portando, indicativa de uma nova metaloprotease
- Imprenta:
- Publisher place: Piracicaba
- Date published: 2006
- Data da defesa: 17.03.2006
-
ABNT
RIFFEL, Alessandro. Avaliação de proteases extracelulares da linhagem Chryseobacterium sp. kr6 e purificação e caracterização de uma metaloprotease queratinolítica. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2006. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11138/tde-21062006-100840/. Acesso em: 25 abr. 2024. -
APA
Riffel, A. (2006). Avaliação de proteases extracelulares da linhagem Chryseobacterium sp. kr6 e purificação e caracterização de uma metaloprotease queratinolítica (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11138/tde-21062006-100840/ -
NLM
Riffel A. Avaliação de proteases extracelulares da linhagem Chryseobacterium sp. kr6 e purificação e caracterização de uma metaloprotease queratinolítica [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11138/tde-21062006-100840/ -
Vancouver
Riffel A. Avaliação de proteases extracelulares da linhagem Chryseobacterium sp. kr6 e purificação e caracterização de uma metaloprotease queratinolítica [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11138/tde-21062006-100840/
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