Estudo da imunogenicidade de diferentes plasmídeos recombinantes que expressam as proteínas prM/E do vírus dengue-4 (2006)
- Autores:
- Autor USP: LIMA, DANIELLE MALTA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Assuntos: DENGUE (DIAGNÓSTICO); BIOLOGIA MOLECULAR (MÉTODOS)
- Idioma: Português
- Resumo: A imunização com DNA plasmidial, expressando regiões imunogênicas da proteína E, constitui uma nova estratégia na elaboração de uma vacina tetravalente contra o vírus dengue. Desde a década de 1970, a Organização Mundial de Saúde tem patrocinado diversos estudos para a obtenção de vacinas para dengue. Até o presente momento nenhuma vacina eficiente e segura está disponível à população. Neste trabalho foram construídos plasmídeos recombinantes para a expressão dos genes responsáveis por codificar o peptídeo sinal e as proteínas prM e E do vírus Den-4 (H-241). Os genes das proteínas prM e E foram amplificados pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), a partir do genoma do vírus dengue-4 obtido de células C6/36 infectadas in vitro. Após a amplificação, estes genes foram então inseridos em um plasmídeo de expressão e, foi realizada a seleção dos clones recombinantes, que foram denominados: pCID4/CL4, pCID4/CL6, pCID4/CL 10, pCID4/CL10N, pCID4/CL11, pCID4/CL12, contendo os genes de interesse. Estes plasmídeos foram analisados com relação ao desenvolvimento de uma resposta imune específica. Camundongos BALB/c foram imunizados por via intramuscular com 100 µg de dose de cada um dos 6 clones recombinantes e do plasmídeo pCI. Foram realizadas três imunizações com intervalos de 15 dias entre elas; 15 dias após a 3ª imunização, os animais foram sacrificados e a resposta imune foi avaliada. No intervalo de cada inoculação, o sangue destes animais foi coletadoatravés de punção do saco retroorbitário, processado para separação do soro e estocado a -70ºC. Após as três imunizações, o baço dos animais imunizados foi divulsionado e as células foram cultivadas na concentração de 1 x'10 POT. 6' células/pocinho, para a realização dos ensaios de dosagem de anticorpos neutralizantes, de citocinas [INF-'gama' e IL-2 (padrão Th-1) e IL4 e 10 (padrão Th-2)] por ELlSA e ensaios de linfoproliferação. Todos os animais ) inoculados com os clones recombinantes produziram anticorpos neutralizantes, contra o vírus dengue-4. Todos os plasmídeos recombinantes apresentaram índices de proliferação perante o estímulo específico, porém os candidatos vacinais pCID4/CL10 e pCI04/CL10N foram os que apresentaram maiores índices de proliferação com relação aos outros plasmídeos recombinantes e com relação ao grupo-controle negativo (pCI). Todos os plasmídeos recombinantes induziram a produção da citocina IFN-'gama' com relação ao estímulo específico. Porém, os candidatos vacinais pCID4/CL10 e pCID4/CL6 foram os que produziram as citocinas INF-'gama' e IL-2, em níveis mais elevados em comparação aos outros plasmídeos recombinantes e ao grupo-controle negativo (pCI). Com relação aos níveis de IL-10 os candidatos vacinais pCID4/CL10, pCID4/CL10N, foram os que induziram melhores níveis desta citocina em comparação aos outros plasmídeos recombinantes. Os resultados sugerem que os plasmídeos recombinantes vacinais pCID4/CL10N e pCID4/CL10 foramcapazes de estimular uma resposta imune específica contra estímulo específico. Também foi observada proteção após o desafio (50% e 80%). Dessa forma, estes plasmídeos recombinantes vacinais podem fazer parte de uma preparação para uma vacina de DNA recombinante tetravalente
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2006
- Data da defesa: 03.02.2006
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ABNT
LIMA, Danielle Malta. Estudo da imunogenicidade de diferentes plasmídeos recombinantes que expressam as proteínas prM/E do vírus dengue-4. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 18 abr. 2024. -
APA
Lima, D. M. (2006). Estudo da imunogenicidade de diferentes plasmídeos recombinantes que expressam as proteínas prM/E do vírus dengue-4 (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Lima DM. Estudo da imunogenicidade de diferentes plasmídeos recombinantes que expressam as proteínas prM/E do vírus dengue-4. 2006 ;[citado 2024 abr. 18 ] -
Vancouver
Lima DM. Estudo da imunogenicidade de diferentes plasmídeos recombinantes que expressam as proteínas prM/E do vírus dengue-4. 2006 ;[citado 2024 abr. 18 ]
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