Caracterização da trealase intestinal da larva de tenebrio molitor e clonagem do cDNA que a codifica (2005)
- Autores:
- Autor USP: DURAN, ANA GILHEMA GOMEZ - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Assuntos: BIOQUÍMICA ANIMAL; INSETOS (ESTUDO); BIOLOGIA (ESTUDOS ESPECÍFICOS); BIOLOGIA MOLECULAR
- Idioma: Português
- Resumo: A trealase intestinal de Tenebrio molitor foi purificada após três etapas cromatográficas (interação hidrofóbica, troca iônica e gel filtração), obtendo-se uma recuperação de 46'POR CENTO', uma atividade especifica de 16,5 U/mg de proteína e um enriquecimento de 73 vezes. A proteína purificada apresenta uma massa molecular de 58 kDa estimada por plotes de Ferguson, pH ótimo de 5,3 e Km de 0,43(MAISOUMENOS)0,03 mM. Estudos de inibição com a enzima purificada mostraram que a mesma é inibida competitivamente por amigdalina ('K IND.i''igual' = 0,22 mM), prunasina ('K IND.i''IGUAL' 0,43 mM), florizina ('K IND.i''IGUAL' 0,50 mM), floretina ('K IND.i''IGUAL' 0,008 mM), metil-a-manosídeo ('K IND.i''IGUAL' 43 mM), salicina ('K IND.i''IGUAL' 186 mM) e glucono-d-lactona ('K IND.i''IGUAL1,4 mM). Mandelonitrila apresentou inibição mista com 'K IND.i''IGUAL' 3,8 e 'alfa''IGUAL'1,5. A enzima não apresentou inibição por 1,10 fenantrolina, gentibiose, metil-a-aglucosídeo e Tris, em concentrações de 4 mM, 10 mM, 200 mM e 264 Mm, respectivamente. Experimentos de inibição, inibição múltipla e de proteção da enzima contra modificadores de resíduos específicos de aminoácidos permitiram idealizar um esquema para o sítio ativo da trealase. Esse sítio ativo teria dois sítios assimétricos para a ligação de glicose. Em um dos sub-sítios liga-se o inibidor floritina e no outro os inibidores metil-a-manosídeo e glucono-'DELTA'-Iactona. Nesse último está presente um resíduo dehistidina que tem como papel modular o p'K IND.a' do carboxilato catalítico. Esse e o resíduo de arginina que atua como doador de prótons, encontra-se na região entre os dois sub-sítios. RT-PCR foi usado para clonar o cDNA que codifica a trealase intestinal de T. molitor. ) Esta proteína é solúvel e apresenta massa molecular prevista pela seqüência de 61 kDa. Tomando por base a seqüência de aminoácidos, esta trealase pode ser classificada na família 37 das glicosídeo hidrolases e faz parte do clã G, onde não se conhecem quais são os grupos envolvidos em catálise e nem a estrutura tridimensional de seus componentes
- Imprenta:
- Data da defesa: 14.10.2005
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ABNT
GOMEZ DURAN, Ana Gilhema. Caracterização da trealase intestinal da larva de tenebrio molitor e clonagem do cDNA que a codifica. 2005. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2005. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01092014-163452/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Gomez Duran, A. G. (2005). Caracterização da trealase intestinal da larva de tenebrio molitor e clonagem do cDNA que a codifica (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01092014-163452/ -
NLM
Gomez Duran AG. Caracterização da trealase intestinal da larva de tenebrio molitor e clonagem do cDNA que a codifica [Internet]. 2005 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01092014-163452/ -
Vancouver
Gomez Duran AG. Caracterização da trealase intestinal da larva de tenebrio molitor e clonagem do cDNA que a codifica [Internet]. 2005 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01092014-163452/
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