Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) (2004)
- Autores:
- Autor USP: NAKAHIRA, MARCEL - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Assuntos: PROTEÍNAS; SEMENTES
- Idioma: Português
- Resumo: Os inibidores de proteases desempenham nas plantas funções como: defesa contra ataque de predadores de sementes, regulação de enzimas endógenas e fontes de proteínas e aminoácidos. Muitos destes inibidores são utilizados em estudos bioquímicos, bem como no tratamento de patologias humanas como inflamação e câncer.Neste trabalho, um inibidor deserinoprotease, presente na semente de Stryphnodendron barbatinan (barbatimão), foi purificado, caracterizado e denominado SbKI. Sementes de barbatimão maduras foram trituradas, até a obtenção de uma farinha, e esta foi suspensa em PBS, pH 7,4 (1:5 m/v), sob agitação por 14 horas a 4oC. O extrato foi centrifugado, filtrado e tratado com PVPP, sendo denominado EB, o qual apresentou inibição da coagulação sangüínea e da atividade de algumas serinoproteases. O inibidor SbKI foi purificado utilizando-se três procedimentos cromatográficos: cromatografia de exclusão molecular (Superdex-75, 10/30), troca iônica (Mono-S HR, 5/5), ambas acopladas em um sistema ÄKTA Purifier e fase reversa (C-18, Waters 250 x 4,6mm) acoplada a um sistema HPLC. Em cada etapa de purificação a presença do inibidor foi monitorada pelos testes de atividade inibitória da tripsina e da coagulação, ambos in vitro. SDS-PAGE, sob condições redutoras, mostrou que o inibidor é formado por duas cadeias polipeptídicas (cadeia pesada e leve) unida por ligação dissulfeto. As cadeias foram separadas pela cromatografia de fase reversa após seremreduzidas e alquiladas. Suas seqüências N-terminais foram determinadas pela degradação de Edman, em seqüenciador automatizado, apresentando alta identidade sequencial com inibidores do tipo Kunitz de outras leguminosas. A determinação da massa molecular do inibidor e de suas cadeias isoladas, foram determinadas por espectroscopia de massa (LC/ESI-MS system) mostrando massas moleculares de 19.570Da, 15530Da e 4040Da, respectivamente. A espectroscopia de dicroísmo circular ) (CD) revelou que o inibidor é formado predominantemente por elementos ß e estruturas desordenadas. SbKI foi estável a variações de pHs (2-12) e temperaturas extremas e a temperatura de transição foi calculada em 73,3'GRAUS'C. A determinação das constantes de inibição ("K IND. I") foi realizada para as serinoproteases tripsina ("K IND.I" = 5,5 nM) e calicreína plasmática ("K IND.I" = 1,1 nM)
- Imprenta:
- Local: São Carlos
- Data de publicação: 2004
- Data da defesa: 17.12.2004
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ABNT
NAKAHIRA, Marcel. Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman). 2004. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2004. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/. Acesso em: 17 abr. 2024. -
APA
Nakahira, M. (2004). Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/ -
NLM
Nakahira M. Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) [Internet]. 2004 ;[citado 2024 abr. 17 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/ -
Vancouver
Nakahira M. Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) [Internet]. 2004 ;[citado 2024 abr. 17 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/
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