Estudo sobre a proteína NS5 de Flavivirus brasileiros (2002)
- Autores:
- Autor USP: BALEOTTI, FLÁVIA GRACIELA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- DOI: 10.11606/D.17.2002.tde-07062023-092409
- Assuntos: VIROLOGIA; FLAVIVIRUS
- Palavras-chave do autor: Dengue; Febre amarela; Genes; Genes; Yellow fever
- Agências de fomento:
- Idioma: Português
- Resumo: No gênero Flavivirus, da família Flaviviridae inclui-se um importante grupo de vírus transmitidos por artrópodes que é responsável por considerável morbidade e mortalidade, como nos casos do dengue e da febre amarela. Onze Flavivirus circulam no Brasil. Os Flavivirus são envelopados, possuem nucleocapsídeo contendo genoma RNA de fita simples e polaridade positiva com aproximadamente 11000 nucleotídeos. O genoma inclui uma pequena região 5' não-codificadora, uma cadeia aberta de leitura (ORF) e um terminal 3' não-codificador. A ORF codifica 3 proteínas estruturais C, preM, E e 7 proteínas não-estruturais NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B e NS5. A proteína não-estrutural 5 (NS5) é a maior (2700 nucleotídeos) e mais conservada proteína dos Flavivirus e acredita-se que possua função de RNA-polimerase RNA-dependente. Foi tema de nosso estudo a sequência nucleotídica do gene NS5 de 15 estirpes de Flavivirus brasileiros, Bussuquara, Cacipacoré, dengue tipos 1 (2 estirpes), 2 (3 estirpes) e 4, Iguape, Ilhéus, Rocio, encefalite de Saint Louis (2 estirpes) e febre amarela (estirpe selvagem e vacinai). Primeiramente, desenvolvemos metodologia de RT-PCR com primers (FG1/FU1RC) amplificadores de 723 nucleotídeos no centro do gene NS5, que se mostrou específica para vírus do gênero porque detectou genoma dos 15 vírus estudados. Também, desenvolvemos nested-PCR com primers (NES A/NES B) internos aos amplicons da RT-PCR, que se mostrou sensível e adequada à confirmação da origem viral dos produtos amplificados. Esta RT-nesfed-PCR possui utilidade como método diagnóstico rápido de infecções por Flavivirus. Em seguida, utilizando sequência de 600 nucleotídeos oriunda dos amplicons da RT-PCR e de seus aminoácidos inferidos, efetuamos estudo filogenético. Árvores filogenéticas criadas pelos métodos neighbor-joining e parcimônia mostraram os Flavivirus brasileirosagrupados em três ramos: ramo do vírus da febre amarela, ramo dos vírus do dengue com sub-ramos para os tipos 1, 2 e 4, e o ramo denominado Encefalite japonesa, que inclui os vírus da encefalite de Saint Louis, Cacipacoré, Iguape, Rocio, Ilhéus e Bussuquara. Os vírus transmitidos por mosquitos Aedes, como dengue e febre amarela, e que também são os únicos Flavivirus causadores de febres hemorrágicas no Brasil mostraram-se agrupados no mesmo ramo. Os vírus transmitidos por mosquitos Culex e que são causadores de encefalite como Rocio, Ilhéus, SLE, Cacipacoré, Bussuquara e Iguape foram agrupados no da Encefalite japonesa. Finalmente, fizemos análise funcional da NS5 de 5 dos Flavivirus estudados observando que a região dos aminoácidos 250 a 900, apresentava alta homologia com RNA-polimerase RNA-dependente de diversos Flaviviridae. Nas sequências nucleotídicas foi possível identificar os motifs A (DTKAWD), B (SGQPDTSAGN), C (GDD) e D (EAGK). O encontro destes motifs característicos sugere fortemente que a NS5 dos Flavivirus possua função RNA-polimerase RNA-dependente
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2002
- Data da defesa: 26.08.2002
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
BALEOTTI, Flávia Graciela. Estudo sobre a proteína NS5 de Flavivirus brasileiros. 2002. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2002. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-07062023-092409/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Baleotti, F. G. (2002). Estudo sobre a proteína NS5 de Flavivirus brasileiros (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-07062023-092409/ -
NLM
Baleotti FG. Estudo sobre a proteína NS5 de Flavivirus brasileiros [Internet]. 2002 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-07062023-092409/ -
Vancouver
Baleotti FG. Estudo sobre a proteína NS5 de Flavivirus brasileiros [Internet]. 2002 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-07062023-092409/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.17.2002.tde-07062023-092409 (Fonte: oaDOI API)
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