Estudo de diferentes métodos de extração de DNA do sangue e otimização da PCR para a amplificação do segmento 'TGR1 IND.E' do genoma de Toxoplasma gondii (1999)
- Authors:
- Autor USP: GOMES, VALERIA MARIA WANDERLEY - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBC
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; PARASITOLOGIA; IMUNOPARASITOLOGIA; IMUNOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: A reativação da toxopiasmose latente é importante pois freqüentemente causa a morte em pacientes com SIDA. Foi otimizado um protocolo de PCR e 'Hemi-nested PCR' para amplificação do segmento TGRIE do genoma de Tgondíi, como seqüência alva do DNA genômico, usando sangue como amostra biológica. O DNA foi extraído pelos métodos caotrópico e saltínt out e avaliado por espectrofotornetria. O DNA extraído por saltingt out mostrou-se mais puro e de modo mais reprodutivo que o DNA obtido pelo método caotrópico (A260/A280 = 1,8 e 1,6, respectivamente), entretanto com menor rendimento. Neste estudo, com ambos os métodos de extração de DNA a PCR apresentou a mesma sensibilidade, mostrada em testes de diluições seriadas. Utilizando-se 0,5 pg de DNA total, houve detecção a partir da diluição de 104 parasitas lml na PCR e de 102 parasitas lml na "Hemi-nested PCR'. Com a obtenção do DNA pelo método de fervura a partir da suspensão de Tgondii em tampão TE, simulando amostras de baixa celularidade, a 'Hemi-nested PCR' detectou 103 parasitas lml. Quando a PCR e 'Hemi-nested PCR' foram avaliadas em indivíduos sorologicamente negativos para toxopiasmose, apresentaram 100% (20120) de especificidade e 12,5% (118) de positividade em amostras de pacientes com toxopiasmose e com HIV em estágio IV. Esta técnica de PCR e "Hemi-nested PCR" otimizada, foi capaz de detectar DNA de T. gondii em paciente imunocompetente e imunodeprimido demonstrando grande potencial como ferramenta útil paraestabelecer o diagnóstico em pacientes com parasitemia
- Imprenta:
- Data da defesa: 17.08.1999
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ABNT
GOMES, Valeria Maria Wanderley. Estudo de diferentes métodos de extração de DNA do sangue e otimização da PCR para a amplificação do segmento 'TGR1 IND.E' do genoma de Toxoplasma gondii. 1999. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 1999. . Acesso em: 19 set. 2024. -
APA
Gomes, V. M. W. (1999). Estudo de diferentes métodos de extração de DNA do sangue e otimização da PCR para a amplificação do segmento 'TGR1 IND.E' do genoma de Toxoplasma gondii (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Gomes VMW. Estudo de diferentes métodos de extração de DNA do sangue e otimização da PCR para a amplificação do segmento 'TGR1 IND.E' do genoma de Toxoplasma gondii. 1999 ;[citado 2024 set. 19 ] -
Vancouver
Gomes VMW. Estudo de diferentes métodos de extração de DNA do sangue e otimização da PCR para a amplificação do segmento 'TGR1 IND.E' do genoma de Toxoplasma gondii. 1999 ;[citado 2024 set. 19 ]
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