Purificação e caracterização físico-química de duas substâncias hemaglutinantes extraídas do fruto de Caesalpinia tinctoria (1998)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, MARLI LOURDES DE - IQSC
- Unidade: IQSC
- Subjects: BIOFÍSICA; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: No presente trabalho foram isoladas duas substâncias do fruto de Caesalpinina tinctoria Domb, ex Dc que apresentam propriedades biológicas e químicas da família das lectinas. Elas promovem a aglutinação de hemácias humanas normais, se ligam emmatrizes polissacarídicas e pelo menos uma tem o caráter glicoprotéico. As lectinas foram extraídas a partir da vagem seca e triturada em meio salino tamponado. O extrato salino foi fracionado em duas faixas de massas moleculares: alta massamolecular (AMM), dialoconcentrado em Centriprep 10, e baixa massa molecular (BMM), obtida do filtrado de Centriprep 10 e subsequente dialoconcentração em centriprep 3. A fraçào BMM (entre 3-10 kDa) foi purificada por cromatografia de fasereversa em C18, por HPLC, em gradiente de TFA/AN, e denominada Lectina de Baixa Massa Molecular (LBMM). A fração AMM (>10kDa) foi isolada por cromatografia de afinidade em uma coluna de quitina, eluida com 'NH IND.4OH' 0,5M, e denominada delectina de Alta Massa Molecular (LAMM). A análise de aminoácidos da LBMM revelou um conteúdo de 23% em aminoácidos ácidos, 41% em aminoácidos hidrofóbicos, 59% em aminoácidos hidrofílicos, 27% de prolina e sua MM foi estimada em 4,1 kDa. A LAMMapresentou 26% de aminoácidos ácidos, 11% de prolina e sua MM foi estimado em 12,5 kDa. A LAMM foi caracterizada como uma glicoproteína pois contém 8,3% de carboidratos. O sequenciamento N-terminal mostrou a homogeneidade dessas lectinas sendoPro-Glu-Thr para a LBMM e'D POT.1'-V-P-A-Y-V-Y-V-H-'F POT.10'-G-F-G-E-E-H-R-D-V-'F POT 20'-D para a LAMM. As lectinas não apresentam especificidade de grupo para hemácias humanas do sistema ABO, e não são inibidas por açúcares simples. A LAMM éuma glicoproteína ligante de quitina embora nas concentrações testadas não inibiu o crescimento de fungos contendo quitina em suas paredes celulares (Trichoderma viride, Aspergillus niger e Penicillium funiculossum). As lectinas foram analisadas por espectroscopia de dicroismo circular (CD) e a desconvolução dos espectros, na região de 190 a 240nm, foi consistente com proteínas que predominam estruturas em folhas 'beta'. Os espectros de CD da LAMM mostraramalterações em função de variações de pH e temperatura que estão associadas com a perda da atividade biológica. A espectroscopia de fluorescência da LAMM nativa, excitada em 280nm, mostrou em máximo de emissão em 338nm. Após ser desnaturada poraquecimento a 80 graus C seu máximo de emissão foi deslocado para 357nm, além de apresentar um leve aumento na intensidade
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 1998
- Data da defesa: 18.09.1998
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ABNT
OLIVEIRA, Marli Lourdes de. Purificação e caracterização físico-química de duas substâncias hemaglutinantes extraídas do fruto de Caesalpinia tinctoria. 1998. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 1998. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Oliveira, M. L. de. (1998). Purificação e caracterização físico-química de duas substâncias hemaglutinantes extraídas do fruto de Caesalpinia tinctoria (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. -
NLM
Oliveira ML de. Purificação e caracterização físico-química de duas substâncias hemaglutinantes extraídas do fruto de Caesalpinia tinctoria. 1998 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Oliveira ML de. Purificação e caracterização físico-química de duas substâncias hemaglutinantes extraídas do fruto de Caesalpinia tinctoria. 1998 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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